Сайт создан на платформе Nethouse. Хотите такой же?
Владельцу сайта

Создание средства

для продления жизни

Экспериментально доказано, что эмбрион вырабатывает сигнал (микро-РНК, упакованные в экзосомы), который попадает в гипоталамус будущей матери через кровь. В результате организм возвращается на репродуктивный биологический возраст на время действия сигнала. Если сигнал повторяется ежедневно, то организм может находиться в репродуктивном биологическом возрасте неограниченное время.

Кушелев:


В ~40 лет включается мягкий феноптоз. В ~80 лет - жесткий, в ~120 лет фатальный. У разных людей могут быть разные диагнозы, но финал один. Старше 121 года на Земле сегодня нет ни одного человека.

В 2014-ом году американские геронтологи реализовали мою схему 2012 года, которую я описал в статье "Прожиточный минимум вампира": http://nanoworld88.narod.ru/data/281.htm

В 2014-ом году, в  нашем эксперименте в Киеве, лабораторная мышь, которой делают инъекции крови беременных лабораторных мышей, живёт уже в полтора раза больше максимальной продолжительности жизни для этой чистой линии. Так что время закупать праймеры. Идентификация сигналов, отключающих феноптоз поможет омолодить всю планету в ближайшие годы... Подробности о праймерах: http://subscribe.ru/archive/science.new … 15120.html


Гетеробионт Кушелева


ГЕТЕРОБИОНТ КУШЕЛЕВА ПОДТВЕРЖДЁН В ИЗРАИЛЕ


Вена, выходящая из головного мозга старой мыши с сигналом старения переключается на организм молодой мыши, и наоборот. В тот момент, когда кровь из мозга старой мыши пройдет через молодой организм и вернется к старому организму, молодой организм заменяется на другой экземпляр. В результате в старый организм сигнал старения не попадает, и он становится вечно-молодым.



Полибионт Кушелева.


Упрощенная схема полибионта Кушелева. Кровь из головы старого животного (N0) переходит в организм молодого N1, из головы молодого N1 - в организм молодого N2, а из головы молодого Nn в организм старого N0. К моменту времени, когда кровь из головы старого дойдёт до организма Nn, молодые организмы заменяются на новые. Таким образом кровь из головы старого организма никогда не попадает в собственный организм. В результате старый организм превращается в вечно-молодой.


Почему не стареет эмбрион?


Не секрет, что во время беременности пожилые женщины временно омолаживаются. Разгадка этой тайны была неожиданной. Геронтологи объединили кровеносные системы старой и молодой крысы в надежде, что их возраст усреднится, т.е. старика можно будет омолодить кровью молодых. Как ни странно, но старая крыса осталась старой, а молодая быстро состарилась. Исследователи изменили условия эксперимента. Взяли кровь молодой крысы и ввели старой. Возраст старой не изменился. Ввели старую кровь в организм молодой. Она состарилась.


Но почему же во время беременности происходит временное омолаживание? Кровь будущего ребёнка и будущей матери взаимно проникают друг в друга. Это значит, что будущий ребёнок должен ускоренно состариться, как молодая лабораторная крыса, пришитая к старой. Однако, этого не происходит. Вместо этого временно омолаживается будущая мать. Мы предложили геронтологам ввести старой крысе не просто кровь молодой крысы, которая не меняет возраст, а кровь беременной. И тут случилось чудо, старая крыса временно омолодилась.


Но ... "нет ничего более временного, чем постоянное". Если вводить кровь беременной крысы в организм старой крысы ежедневно, то старая крыса становится ... вечно молодой! Это можно применить и к людям, но цена вечной молодости будет типа 500 евро в день. А можно дешевле? Для этого нужно прочесть коды сигналов, которые передаются от эмбриона в гипоталамус будущей матери через кровь.


Схема этого эксперимента обсуждается на международном форуме, где принимают участие геронтологи из Петербурга и Киева, молекулярный биолог из Харькова и генетик из Орла. Первые этапы этого эксперимента выполнены в Киеве и Иерусалиме. Возможность вернуть молодость экспериментально доказана, но ... прочесть сигналы бесплатно не удаётся.


Этот самый дорогой этап требует применение лабораторного оборудования, препаратов, привлечения дополнительных специалистов, которым нужно заплатить зарплату. Часть сметы (на сумму 250 000 евро) уже составлена. Общая сумма может достигнуть миллиона евро. Но в результате мы сможем вернуть молодость миллиардам стариков, который уносят с собой в могилу уникальный опыт и профессионализм. Если их омолодить, то с новыми силами они легко решат проблемы, которые не по плечу молодым и неопытным.


От Вас, уважаемый потенциальный инвестор, требуются не столько финансы, сколько организаторские способности, чтобы мобилизовать Ваших знакомых для решения этой проблемы. А у Ваших знакомых тоже есть знакомые, которые не захотят умирать, если через год можно будет уже омолаживаться. Каждый отдал бы рубль, чтобы вернуть молодость, нужно лишь поставить всех в известность 


Научные подробности можно прочесть здесь: http://nanoworld.org.ru/topic/818/page/6/




Изучайте материалы по возвращению молодости: http://nanoworld88.narod.ru/data/515.htm



Skype

[24.12.2015 16:06:51] Zoldrax: Привет!
[24.12.2015 16:07:24] Zoldrax: Израильтянам удалось сделать гетерохронный парабионт с беременной молодой мышью!

[24.12.2015 16:15:48] Zoldrax:

http://nanoworld88.narod.ru/data/515_files/0_141ac2.png


[24.12.2015 17:50:44] Кушелев Александр Юрьевич: Круто!
[24.12.2015 17:51:04] Кушелев Александр Юрьевич: А сколько всего типов иРНК в экзосомах делает эмбрион?
[12:28:22] Zoldrax: Там нет ничего про РНК. Там показали отсутствие миграции клеток от молодой к старой. Т.е. GFP (зеленый флуоресцентный белок), вроде, не проходит.
[12:29:09] Zoldrax: И эффект от беременной молодой почти в два раза больше, чем от просто молодой парабионта.
[12:40:29] Кушелев Александр Юрьевич: Очень круто! Мой вопрос относится не к этой статье, а вообще тебе известен на него ответ?
[12:42:21] Zoldrax: Нет! Там уже доказано что и ДНК мигрируют. Т.е. код ребенка можно определить по крови матери. Пока точность не очень, но это технические проблемы. Принципиально точно можно...
[12:44:01] Zoldrax: Мне из этой статьи не нравится, что эффект дает псевдобеременность. Правда слабый.
[12:44:26] Zoldrax: Т.е. эмбриона нет, а эффект регенерации есть.
[12:45:18] Кушелев Александр Юрьевич: Надо разобраться...
[12:46:29] Zoldrax: Надо…
[12:48:10] Zoldrax: Видимо эффект блокировки при беременности многофакторный, раз при псевдобеременности частично проявляется.
[12:48:40] Zoldrax: А многофакторность - это плохо…
[14:37:31] Кушелев Александр Юрьевич: Про многофакторность я писал ещё пару лет назад
[14:38:10] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно узнать, сколько всего типов иРНК в экзосомах делает эмбрион
[14:38:23] Кушелев Александр Юрьевич: Если это не очень много, скажем, меньше 1000, то прочесть их все
[14:38:47] Кушелев Александр Юрьевич: А потом методом двоичного поиска исключить всё, кроме сигнала отключения механизма старения
[14:40:12] Кушелев Александр Юрьевич: Идея простая. разделять сигналы в экзосомах, например, по массе. Допустим, разделили на 2 фракции. Если одна из них даёт эффект, а вторая нет, то число сигналов, подлежащих анализу, уменьшается сразу вдвое!

[14:40:55] Кушелев Александр Юрьевич: И так за несколько этапов эксперимента можно будет определить все составляющие сигнала, отключающего механизм старения.

Материал с форума лаборатории Наномир: 

Alina пишет: Вы удивительный человек, Александр...!!! Оглянитесь вокруг... Вы вовсе не один... Просто пока нет таких смелых, как Вы... Но очень скоро Вы почувствуете, как Вашими открытиями заинтересуется все больше и больше людей... Даже появятся те, которые захотят претворить их в жизнь... Удачи Вам и дальнейших успехов в Вашей достойной деятельности...!!!

Александр Кушелев: Благодарю за моральную поддержку! 

 Обсуждение



Skype, 2014-08-10:

[09.08.2014 22:28:09] Кушелев Александр Юрьевич: Исполнения желаний и вечной молодости!
[8:52:36] ТФ: Доброе утро! Спасибо большое, конечно с твоей помощью
[8:53:32] Кушелев Александр Юрьевич: Доброе утро!
[8:53:57] Кушелев Александр Юрьевич: Американские ученые уже смогли реализовать дорогой вариант "эликсира" на лабораторных животных
[8:55:11] Кушелев Александр Юрьевич: В 2012-ом году я написал статью: "Прожиточный минимум вампира", где показал теоретическую возможность омоложения млекопитающих путём ежедневной замены крови. Американцы этот вариант реализовали в 2014 году, доказав принципиальную возможность омоложения экспериментально.
[8:55:41] Кушелев Александр Юрьевич: Но этот вариант для человека обойдётся приблизительно в 500 долл. ежедневно (7 литров крови по цене донорской)
[8:56:10] Кушелев Александр Юрьевич: Теперь задача перешла из разряда: "Можно ли?" в разряд "как сделать дешевле"
[8:57:02] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве третий год идут наши совместные эксперименты по созданию эликсира, который будет стоить не 500 долл., а 20 копеек за один день "вечной" молодости.
[8:57:51] Кушелев Александр Юрьевич: Сейчас вопрос стоит о том, где найти инвесторов, которые оплатят праймеры, с помощью которых мы сможем выделить сигнал отключения старения (феноптоза) из 10 000 сигналов эмбриона.
[8:58:58] ТФ: Молодец


1. Стволовые клетки гипоталамуса частично контролируют скорость старения через экзосомальные микроРНК
Hypothalamic stem cells control ageing speed partly through exosomal miRNAs
http://rdcu.be/uJ6e

2. Сборник статей про активирующие РНК, который показывает принципиальную возможность кодовой (матричной) модуляции
RNA Activation
https://www.springer.com/gp/book/9789811043093

3. Публикация о роли факторов транскрипции в продолжительности жизни https://www.nature.com/articles/s41467-017-00899-5.pdf.

Эта информация не противоречит позиции А.Ю.Кушелева о функции регуляторных микро РНК эндосом в регуляции старения, поскольку мишенями данных микро РНК могут быть матричные РНК именно этих факторов транскрипции (mammalian vascular factor Kruppel-like family of transcription factor 4).

Статьи

Биомолекулярный сигнал отключения феноптоза - запрограммированной смерти. Гормоны имморталинов


ЧТО НУЖНО ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ БИОМОЛЕКУЛЯРНОГО СИГНАЛА ОСТАНОВКИ СТАРЕНИЯ


Механизм старения можно отключать, что и происходит у млекопитающих во время беременности, если самка старше границы репродуктивного возраста. Экспериментально доказано, что эмбрион вырабатывает сигнал (предположительно мРНК, упакованные в экзосомы), который попадает в гипоталамус будущей матери через кровь. В результате организм возвращается на репродуктивный биологический возраст на время действия сигнала. Если сигнал повторяется ежедневно, то организм может находиться в репродуктивном биологическом возрасте неограниченное время. 


РАБОТЫ, ПОКАЗЫВАЮЩИЕ ВОЗМОЖНОСТЬ ОБЪЯСНЕНИЯ ФАКТОРА СТАРЕНИЯ КОДОВОЙ МОДУЛЯЦИЕЙ ВОЗРАСТА АКТИВИРУЮЩИМИ ЭКЗОСОМАЛЬНЫМИ РНК


Мы стали перебирать гормоны плаценты в поисках сигнала, отключающего старение (по научному - феноптоз, запрограммированная гибель организма). Концентрация гормонов-имморталинов должна резко нарастать в первом триместре беременности. Проверив все 70 гормонов плаценты мы обнаружили, что ни один из них не вырабатывается в первом триместре беременности с нужной интенсивностью. Тогда мы стали проверять гормоны эмбриона и обнаружили, что один из них - "наш гормон". Это - аналог гипоталамусного соматостатина, который замещает в организме гипоталамусный соматостатин, но является пустышкой, т.е. не угнетает выработку гормона роста, соматотропина. В результате регенерация тканей, в частности, мышечных возобновляется и мускулатура пожилых женщин становится снова, как у молодых.


ГЕТЕРОБИОНТ КУШЕЛЕВА ПОДТВЕРЖДЁН В ИЗРАИЛЕ

Таким образом, если мы определим все гормоны эмбриона, образующие группу имморталинов, т.е. отключающих феноптоз, будем синтезировать их с помощью бактерий, как квас (технология стандартная), принимать ежедневно, то биологический возраст вернется на отметку ~30 лет примерно за полгода и будет держаться на этой отметке неограниченное время. А это значит, что мы не будем болеть возрастными болезнями. Например, вероятность заболеть раком после 40 лет возрастает в ~20 раз. Вам это нужно? Мне нет

Программу "феноптоз" отключают гормоны в первом триместре беременности. А чтобы она была отключена всегда, достаточно узнать коды этих гормонов. Код одного из ~14, эмбрионального аналога гипоталамусного соматостатина, я уже узнал, осталось ещё ~13 кодов, "и золотой ключик у нас в кармане", но в одиночку это может затянуться на годы, поэтому я и приглашаю всех желающих приблизить своё "вечной и счастливо" присоединяться. Вместе мы - сила!


Что нужно для выделения биомолекулярного сигнала остановки старения

Возраст управляется сигналами, распространяющимися через кровь, а сигналы эти, по одной из гипотез, представляют собой информационные сообщения, записанные на РНК и упакованные в мезосомы. Эти информационные "посылки" отправляет эмбрион в гипоталамус будущей матери через общий кровоток. Среди тысяч разнообразных информационных "посылок" сигнал отключения феноптоза теряется. Найти его помогут праймеры, которые способны узнать каждую РНК из этого многотысячного разнообразия. 


2010 - 2011


Идея эксперимента Кушелева, а позднее Золдракса была сформулирована и опубликована нами в 2010-ом году. В 2011-ом году наш сотрудник написал письмо профессору-геронтологу из Израиля.














2014


Ответа мы не получили, но в 2014-ом году группа геронтологов под начальством этого профессора провела эксперимент по нашей схеме: http://subscribe.ru/archive/science.new … 74455.html


Это - победа! Продемонстрирована возможность создания эликсира, возвращающего молодость. Ищите инвесторов, и мы омолодим планету.http://nanoworld.org.ru/topic/818/page/3/


2016


Кушелев: Чтобы вернуть молодость по-настоящему у инвесторов появился конкретный шанс:

http://nanoworld.org.ru/post/83214/#p83214

Виктория Соколик пишет:

Для экспериментального анализа микроРНК экзосом:
Top-quality miRNA studies from pure exosomes
Diagenode
New seamless exosome isolation solution for miRNA studies
Diagenode guarantees the purest isolation of exosomes from biofluids and liquid biopsies for:
High-quality CATS RNA-seq library preparation
High yields of miRNAs from our new superior exosome isolation workflow
Learn more about superior exosome isolation and miRNA-seq


ОБСУЖДЕНИЕ ДИЗАЙНА ЭКСПЕРИМЕНТА 2014-2016


2014


2014.09.03 22:18:33

http://nanoworld.org.ru/topic/818/


Старение является результатом незавершенной эволюции человека, поскольку жизнь напрямую зависела от адаптации к изменяющимся условиям внешней среды. Основная задача программы развития, заложенная в геноме человека, направлена на достижение полового созревания и оставление потомства. Дальнейшее состояние организма уже практически ничем не регламентируется, и ожидаемая продолжительность жизни особи напрямую зависит исключительно от внешних условий жизни.


Согласно современным взглядам, сам процесс старения начинается сразу же после окончания физического роста человека, когда достигается максимальная плотность клеток. Установлено, что в это время в крови начинает циркулировать фактор, или группа факторов, тормозящих рост органов и пролиферацию клеток, в том числе и стволовых. С этого момента начинается процесс, который упрощенно можно назвать «дифференцировкой организма»: происходит адаптация к внешним условиям жизни, элиминируются «неиспользуемые» клетки и ткани. Механизм, регулирующий реорганизацию жизнедеятельности органов и тканей после остановки роста, до сих пор остается практически неизученным. Сложность заключается в том, что рост тканей регулируется не только факторами, циркулирующими в крови, но и механизмами межклеточной «контактной» регуляции, а также нейрональной периферической активностью.


Исследования, проведенные на модели молодых и старых животных с общим кровообращением (гетерохронного парабиоза), показали, что взаимный обмен кровью приводит к обоюдным эффектам у молодых и старых животных. У старых животных после обмена кровью с молодыми на короткий срок улучшается регенерация мышц, генерация новых нервных клеток, когнитивные функции (1, 2). У молодых животных после обмена кровью со старыми тормозятся процессы генерации новых нервных клеток головного мозга, снижаются функции иммунной системы, снижается продукция половых гормонов и у самок наступает период «климакса» (2, 3, 4, 5). Разница состоит в том, что положительные эффекты у старых животных являются временными и быстро проходят, а отрицательные эффекты у молодых животных обладают длительным эффектом и приводят к снижению продолжительности жизни молодых мышей. Показано, что ряд факторов старой крови, в частности Эотаксин, частично коррелируют с возникающими возрастными изменениями у молодых животных (2). Однако элиминация подобных факторов из крови является довольно сложным процессом, поскольку большинство факторов продуцируется клетками большинства тканей организма.


Возрастные изменения активности головного мозга в целом, и ядер гипоталамуса в частности, до сих пор являются практически неизученными. Хотя большинство исследователей склонятся к выводу, что главный регулятор скорости старения расположен именно в структурах головного мозга. В 2013 году Zhang и его коллеги показали, что решающее значение в процессах старения у мышей может иметь гипоталамус. Они показали, NF-kВ-зависимая активация нейронов в гипоталамусе увеличивается с возрастом и, пришли к выводу, что активность гипоталамуса влияет на спад когнитивных и физических функций у мышей. Было также установлено, что IКК-? и NF-kB ингибируют продукцию гонадотропного рилизинг гормона (GnRH). Их исследования показали, что при введении GnRH замедляется процесс старения и улучшаются процессы нейрогенеза у мышей. Авторы пришли к выводу, что: 1) гипоталамус играет программную роль в процессе старения; 2) усиление продукции GnRH в гипоталамусе является возможной тактикой для увеличения продолжительность жизни (6).


В работах сотрудников нашего института было установлено, что слабая электрическая стимуляция отдельных ядер гипоталамуса приводит к улучшению состояния старых животных и увеличению продолжительности жизни [ Дубилей Т.А., 2009 ]. Однако механизм реализации этого воздействия остается до конца неизученным.

В настоящий момент существует несколько подходов к увеличению продолжительности жизни, но все они базируются либо на замещении в организме специфических биологически-важных молекул (например, введение GnRH), либо на использовании неспецифических блокаторов активности клеток (например, использование рапамицина). Но оба подхода имеют один недостаток ? они не устраняют причину старения и требуют проведение постоянных интервенций. Наш подход предполагает использование биотехнологических методов для локального специфического изменения активности транскриптома отдельных ядер гипоталамуса с целью увеличения продукции ряда биологически-важных молекул и увеличения продолжительности жизни.


Целью данного проекта является поиск генов, экспрессируемых в разных ядрах гипоталамуса, «включение» и «выключение» которых с использованием специфических микро-РНК (по отдельности, или в комбинации) будет способствовать улучшению физиологического состояния и увеличению продолжительности жизни экспериментальных животных.


Задачи проекта: проведение скрининга активности транскриптома отдельных ядер гипоталамуса, подбор специфических микро-РНК, введение которых в отдельные ядра гипоталамуса приведет к восстановлению синтеза специфических гормонов и увеличению продолжительности жизни.


Дизайн исследования:


1. Животные - мыши самки линии С57BL/6 возрастом 3 мес (молодые), 10-12 мес (стареющие), 21-23 мес (старые).

2. Экспериментальные модели - выделение отдельных ядер гипоталамуса и скрининг транскриптома (экспрессии генов), стереотаксическое введение микро-РНК стареющим животным, анализ биомаркеров старения, создание гетерохронных парабиотических пар (обычно тестирование факторов индуцирующих старение, экспериментально весьма сложно, поскольку старение наиболее часто используемого в эксперименте животного (мыши) длится 2 года. Поэтому тест-системой для поиска индукторов старения будет модель гетерохронного парабиоза, которая позволяет выявить первые признаки старения молодого партнера в течение 1,5 месяцев сосуществования его со старым, по разработанной нами схеме).

3. Методы - qPCR, sequencing, hybridization in situ, immunohistochemistry, ELISA, проточная цитометрия.

4. Тестируемые показатели:
4.1. Уровень экспрессии генов в разных ядрах гипоталамуса.
4.2. Уровень половых гормонов в плазме крови. 
4.3. Оценка состояния иммунной системы.
4.4. Сбор и криосохранение плазмы крови экспериментальных животных.


https://img-fotki.yandex.ru/get/9067/158289418.23b/0_1396cc_7b990b4b_orig.png
http://img-fotki.yandex.ru/get/5101/158 … 6_orig.png


Литература:

1. Conboy I.M., M.J. Conboy, A.J. Wagers, E.R. Girma, I.L. Weissman, T.A. Rando. Rejuvenation of aged progenitor cells by exposure to a young systemic environment // Nature, Vol 433, 17 February 2005. 
2. Villeda SA, Luo, Mosher KI, Zou B, Britschgi M, Bieri G, Stan TM, Fainberg N, Ding Z, Eggel A, Lucin KM, Czirr E, Park JS, Couillard-Despr?s S, Aigner L, Li G, Peskind ER, Kaye JA, Quinn JF, Galasko DR, Xie XS, Rando TA, Wyss-Coray T. The ageing systemic milieu negatively regulates neurogenesis and cognitive function. Nature. 2011; 477:90–94.http://www.nature.com/nature/journal/v4 … 10357.html . Accessed July 11, 2014.
3. Pishel I, Shytikov D, Orlova T, Peregudov A, Artyuhov I, Butenko G. Accelerated aging versus rejuvenation of the immune system in heterochronic parabiosis. Rejuvenation Res 2012; 15: 239-248. 
4. Butenko GM, Gubrii IB. Inhibition of the immune responses of young adult CBA mice due to parabiosis with their old partners. Exp Gerontol 1980;15: 605-10.
5. Губрий И.Б., Резников А.Г., Демченко В.Н., Бутенко Г.М. Прекращение овариальной цикличности у молодой мыши при парабиозе ее со старой // Бюлл. Эксп. Биол. Мед. ? 1987. ? № 2. ? С. 205?208. 
6. Zhang G, Li J, Purkayastha S, Tang Y, Zhang H, Yin Y, Li B, Liu G, Cai D. Hypothalamic programming of systemic ageing involving IKK-?, NF-?B and GnRH. Nature. 2013; 497:211–216. http://www.nature.com/nature/journal/v4 … 12143.html .


Технология возвращения молодости в общих чертах определилась 1 , 2 , 3


1. Нужно идентифицировать сигнал отключения феноптоза во время беременности.
Для этого нужно:

А. пометить все сигналы эмбриона и выделить помеченные сигналы, попавшие в гипоталамус будущей матери.
Б. прочесть и составить карту сигналов "эмбрион-гипоталамус".
В. выделить из всех сигналов только те, которые отключают феноптоз.

2. Синтезировать сигналы, отключающие феноптоз в промышленных масштабах.




Разработка биотехнологических подходов к продлению жизни.


Skype, 2014-09-11:

[9:54:48] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог. Встреча *****
Всё-таки непонятно, почему нельзя объединить кровеносные системы, например, 10 мышей, соединив их хвостами? Хвосты должны выдержать 
[9:55:41] Кушелев Александр Юрьевич: Было бы очень круто создать полибионт с одной старой мышкой и 9 молодыми. Согласитесь 
[9:56:40] Кушелев Александр Юрьевич: На инвесторов больше всего произведет эффект возврашения репродуктивного возраста.


http://img-fotki.yandex.ru/get/9506/158289418.124/0_ecb00_6ce4a002_orig.jpg


2014.09.16 16:12:06

Кушелев: С увеличением дозы крови беременных, вводимой старым мышам, продолжительность жизни возрастала. Больше доза - меньше "токсичность" 

А исследователи из США показали, что ежедневная замена старой крови на кровь молодых животных приводит к омоложению.

Так что весь вопрос в дозировке. Если дозировка крови беременных для достижения омоложения будет существенно меньше, чем дозировка не беременных, то это - очередная научная победа.

А пока удалось показать, что увеличение дозы в 10 раз вернула сокращенную продолжительность жизни практически к норме. Но при этом доза всё ещё слишком мала для омоложения. Она меньше процента от общего объёма крови.



2014.12.23 19:31:50

http://subscribe.ru/archive/science.new … 10717.html

Самым главным для современной цивилизация является проблема омоложения. Омоложенные люди смогут быстрее поднять цивилизацию на новую ступень развития.

Чтобы вернуть молодость, нужно ... дезинформировать гипоталамус 

Эмбрион во втором триместре беременности передаёт в гипоталамус будущей матери сигнал, отключающий механизм старения. Как его идентифицировать?

Можно перебирать все сигналы эмбриона, которых около 10 000, но это дорогой путь. Удешевить его на полтора-два порядка можно путём анализа только тех сигналов, которые дошли до гипоталамуса будущей матери. Как это реализовать? Нужно прочитать сигналы, поступившие в гипоталамус от эмбриона.


https://img-fotki.yandex.ru/get/15483/158289418.1af/0_107f56_b63e7e08_orig.jpg


Для этого достаточно пометить все сигналы эмбриона, например, люминесцентной меткой. В результате мезосомы (контейнеры, в которых эмбрион отправляет сигналы в т.ч. в гипоталамус) станут видимыми. Меченые мезосомы эмбриона из гипоталамуса будущей матери нужно прочесть методом ПЦР. Сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус будущей матери на полтора-два порядка меньше, чем общее количество сигналов эмбриона. Это и позволит упростить задачу идентификации сигналов, отключающих феноптоз (запрограммированное старение и смерть организма).

http://nanoworld.org.ru/topic/818/page/2/

21.12.2014 9:49:59] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог!
[21.12.2014 9:50:11] Кушелев Александр Юрьевич: Я придумал, как упростить задачу:http://nanoworld.org.ru/topic/972/
[21.12.2014 9:51:25] Кушелев Александр Юрьевич: Можно перебирать все сигналы эмбриона, которых около 10 000, но это дорогой путь. Удешевить его на полтора-два порядка можно путём анализа только тех сигналов, которые дошли до гипоталамуса будущей матери. Как это реализовать? Нужно прочитать сигналы, поступившие в гипоталамус от эмбриона.
Для этого достаточно пометить все сигналы эмбриона, например, люминесцентной меткой. В результате мезосомы (контейнеры, в которых эмбрион отправляет сигналы в т.ч. в гипоталамус) станут видимыми. Меченные мезосомы эмбриона из гипоталамуса будущей матери нужно прочесть методом ПЦР. Сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус будущей матери на полтора-два порядка меньше, чем общее количество сигналов эмбриона. Это и позволит упростить задачу идентификации сигналов, отключающих феноптоз
[18:35:09] Кушелев Александр Юрьевич: Здравствуйте, Геронтолог!
[18:35:31] Геронтолог: Здравствуйте, Александр!
[18:36:16] Кушелев Александр Юрьевич: Мне объяснил Золдракс, что можно пометить все сигналы эмбриона, но только не люминесцентными, а радиоактивными метками. А потом выловить те, что попали в гипоталамус будущей матери.
[18:36:30] Кушелев Александр Юрьевич: И тогда из 10 000 сигналов останутся штук 30 ...
[18:36:38] Кушелев Александр Юрьевич: Их-то и прочесть праймерами
[18:37:04] Кушелев Александр Юрьевич: Это можно сделать гораздо проще, быстрее и дешевле, чем возиться со всеми сигналами эмбриона
[18:37:08] Кушелев Александр Юрьевич: Логично?
[18:38:11] Геронтолог: Логично. Но я не представляю, как это сделать...
[18:38:36] Геронтолог: Я имею в виду - пометить сигналы.
[18:38:41] Кушелев Александр Юрьевич: А можно пометить всего эмбриона?
[18:39:04] Кушелев Александр Юрьевич: А сигналы, которые от него попадут в гипоталамус будущей матери, прочесть с помощью ПЦР
[18:39:17] Геронтолог: Я не знаю таких методов!
[18:39:39] Кушелев Александр Юрьевич: А как Вы читаете и-РНК? Разве не методом ПЦР?
[18:39:58] Геронтолог: Методом ПЦР нельзя пометить сигналы.
[18:40:29] Геронтолог: Я говорю именно о методах мечения - они разные для молекул с разной структурой...
[18:42:50] Кушелев Александр Юрьевич: Золдракс написал, что иРНК можно пометить радиоактивными метками
[18:44:11] Кушелев Александр Юрьевич: Это позволит их обнаружить в гипоталамусе
[18:44:30] Кушелев Александр Юрьевич: И только их и нужно прочитать, т.е. определить нуклеотидную последовательность
[18:45:06] Кушелев Александр Юрьевич: А дальше убрать лишние, оставить только отключение феноптоза
[18:45:19] Геронтолог: У нас сейчас есть замороженные остатки крови беременных самок - если Золдракс знает, кто может пометить имеющуюся в плазме иРНК - я могу передать материал для мечения.
[18:45:35] Кушелев Александр Юрьевич: ОК!
[18:45:41] Кушелев Александр Юрьевич: Сейчас напишу ему
[18:46:27] Кушелев Александр Юрьевич: Но кровь самок вся попадёт в гипоталамус. Это не то. Нужно метить эмбрион
[18:47:09] Кушелев Александр Юрьевич: Из эмбриона только часть сигналов попадёт в гипоталамус. Остальные предназначены для других органов
[18:47:56] Кушелев Александр Юрьевич: А прочесть нужно только те меченные сигналы эмбриона, которые попали в гипоталамус. Их будет мало по сравнению со всеми сигналами эмбриона.
[18:49:46] Геронтолог: В крови находятся "избранные" сигналы - их меньше, но мне кажется, что они как раз и являются "регуляторными".
[18:51:26] Кушелев Александр Юрьевич: В крови эмбриона. Но в крови будущей матери гораздо больше сигналов.
[18:51:56] Кушелев Александр Юрьевич: Зачем нам возиться с сигналами, которые попадут в гипоталамус не от эмбриона?
[18:54:06] Кушелев Александр Юрьевич: В принципе, эксперимент с меченной кровью беременных тоже может дать очень важную информацию. Так что его тоже нужно провести.
[18:54:32] Кушелев Александр Юрьевич: Ведь не факт, что все сигналы, отключающие феноптоз вырабатываются эмбрионом...
[18:54:54] Кушелев Александр Юрьевич: Жду ответа от Золдракса

13 2015.01.20 21:26:35

Привет! Геронтолог спрашивает, как пометить кровь беременных мышей радиоактивными метками, чтобы потом вылавливать сигналы, которые попадут в гипоталамус?
[20:41:29] Zoldrax: Привет! Я не специалист, но предполагаю, что достаточно кормить (поить) изотопами входящими в нуклиотиды.
[20:57:44] Кушелев Александр Юрьевич: Благодарю! Но в этом случае не только эмбрион будет помечен радиоактивной меткой, но и сам гипоталамус...
[20:58:18] Кушелев Александр Юрьевич: Так что нужно как-то "подкормить малыша" 
[20:58:42] Zoldrax: Да. Я ошибся. Тогда не знаю.
[21:00:12 | Изменены 21:00:20] Кушелев Александр Юрьевич: Может инъекция в эмбрион?
[21:00:12] Zoldrax: Это может быть сложнее, чем кажется
[21:01:03] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть пометить кровь беременной и сравнить, что дополнительно попало в гипоталамус по сравнению с небеременной?
[21:01:15] Zoldrax: Не факт, что изотоп до секреции информационных РНК в экзосомах доберется.
[21:01:47] Кушелев Александр Юрьевич: А почему саму мезосому нельзя флюоресцентной меткой пометить?
[21:02:02] Zoldrax: Так изотопы будут повсюду. А с беременными парабионтами были проблемы.
[21:02:26] Кушелев Александр Юрьевич: А зачем на парабионты?
[21:02:46] Кушелев Александр Юрьевич: У нас есть замороженная кровь беременных, в которой есть в т.ч. сигнал отключения феноптоза
[21:03:02] Кушелев Александр Юрьевич: Надо посмотреть, что из этой крови попадёт в гипоталамус
[21:03:17] Zoldrax: Я незнаю как пометить экзосому. Это можно когда известен весь их путь. В каких клетках экспрессируются.
[21:03:18] Кушелев Александр Юрьевич: И вычесть из этого набора сигналов то, что бывает без беременности
[21:03:51] Кушелев Александр Юрьевич: Экзосомы метят флюоресцентными метками. Я видел запись. Попробую дать ссылку
[21:05:18] Zoldrax: Ну может быть. Надо разбираться… Я пока не очень представляю насколько окраска существующих эекзосом может повлиять на их избирательность в месте назначения.
[21:05:33] Кушелев Александр Юрьевич: http://elementy.ru/news/432346
[21:05:50] Кушелев Александр Юрьевич: Нам не избирательность нужна
[21:05:54] Кушелев Александр Юрьевич: Нам нужно их видеть
[21:06:23] Кушелев Александр Юрьевич: Если в гипоталамус попали подкрашенные экзосомы, дальше мы анализируем их содержание
[21:06:48] Zoldrax: Вообще очень много экзосом преодолевает гематоэнцефалический барьер. Там специальный механизм переноса есть в этом барьере.
[21:06:59] Кушелев Александр Юрьевич: Это неважно
[21:07:26] Кушелев Александр Юрьевич: Важно, что из 10 000 сигналов эмбриона в гипоталамус будущей матери попадёт всего штук 300 или меньше
[21:07:36] Zoldrax: Ну значит надо покрасить как в статье.
[21:07:46] Кушелев Александр Юрьевич: ОК
[21:08:00] Кушелев Александр Юрьевич: Когда приступим к покраске? 
[21:09:47] Кушелев Александр Юрьевич: ОК!
[21:12:19] Zoldrax: Вообще технологии секвенирования уже почти дошли (осталось совсем чуть-чуть) до того, чтобы правильно их применить к пониманию механизма фактора старения.
[21:12:54] Zoldrax: Жаль что так и нет доказательного эксперимента по блокированию фактора старения у беременных.
[21:13:28] Кушелев Александр Юрьевич: Большие дозы нужны...
[21:14:42] Zoldrax: Я к тому, что нужен доказательный эксперимент, тогда можно убедить народ метить экзосомы.
[21:15:08] Кушелев Александр Юрьевич: А вампирская терапия?
[21:16:45] Zoldrax: Она к беременности не относится. Упрямый народ. Говорят, что мы просто свободные радикалы убираем, вместе со старой кровью. Хотя уже свободнорадикальную теорию старения официально “закрыли”.
[21:17:11] Кушелев Александр Юрьевич: Это точно
[21:18:51] Кушелев Александр Юрьевич: А метить экзосомы есть смысл по-любому. Ведь зная сигналы, которые попадают в гипоталамус, можно их перебирать и выяснить, отключается феноптоз или нет именно таким способом 
[21:20:17] Zoldrax: Да только потом надо как-то отобрать только помеченные, чтобы отсеквенировать и получить последовательность.
[21:20:37] Кушелев Александр Юрьевич: Так помеченные видно 
[21:20:50] Кушелев Александр Юрьевич: Берёшь пинцетом светящуюся экзосому...
[21:21:40] Zoldrax:  Нужен пикопинцет 
[21:22:22] Кушелев Александр Юрьевич: Надо у Геронтолога спросить, как отсеивают меченные экзосомы


2013


Детализация дизайзна эксперимента 2013

http://nano-world-articles.nethouse.ru/page/1024175


2015


2015.01.20 22:11:43

[21:26:10] Zoldrax: Я так понимаю, все очень не просто. Они просто отделить экзосомы из раствора только ультрацентрифугированием в градиенте сахаров могут.
[21:27:44] Кушелев Александр Юрьевич: Может можно пометить так, чтобы и отделить можно было меченные?
[21:52:10] Zoldrax: Если бы они были ограниченного набора последовательностей, то в ультрацентрифуге куски днк с изотопами разделяли. Но это были идентичны и без оболочки.
[21:53:24] Кушелев Александр Юрьевич: Так оболочку убрать - не проблема. Главное - отделить светящиеся экзосомы от остальных
[21:59:39] Zoldrax: Просто был эксперимент над ДНК, когда одинаковые куски с разными изотопами разделяли и разделяющей способности хватило.
[22:00:33] Zoldrax: При разных последовательностях в экзосомах будет непонятно, то ли это изотопы, то ли разные последовательности.
[22:03:10] Кушелев Александр Юрьевич: Нам главное - собрать в кучу светящиеся экзосомы. Дальше всё просто. Они растворяются, а освободившиеся РНК читаются методом ПЦР
[22:04:14] Zoldrax: Да. Сейчас даже без ПЦР можно по одной молекуле.
[22:04:31] Кушелев Александр Юрьевич: Это радует
[22:04:46] Кушелев Александр Юрьевич: Нам главное - уменьшить число сигналов
[22:04:47] Zoldrax: Но общедоступно пока только с ПЦР.
[22:04:52] Кушелев Александр Юрьевич: ОК
[22:07:19] Zoldrax: Так если экзосомы можно выделить из гипоталамуса может достаточно будет набора последовательностей всех экзасом гипоталамуса до беременности и после.
[22:09:20] Кушелев Александр Юрьевич: Во-первых, до беременности там много сигналов. Во-вторых, во время беременности там есть сигналы не из эмбриона. Хотя может быть они тоже относятся к системе отключения феноптоза...
[22:11:51] Zoldrax: Может их и не так много - различий между экзосомами гипоталамуса.
[22:12:54] Кушелев Александр Юрьевич: Может


2015.01.21 11:50:12

Технология возвращения молодости в общих чертах определилась.

1. Нужно идентифицировать сигнал отключения феноптоза во время беременности.
Для этого нужно:

А. пометить все сигналы эмбриона и выделить помеченные сигналы, попавшие в гипоталамус будущей матери.
Б. прочесть и составить карту сигналов "эмбрион-гипоталамус".
В. выделить из всех сигналов только те, которые отключают феноптоз.

2. Синтезировать сигналы, отключающие феноптоз в промышленных масштабах.


2015.02.24 12:20:38

Skype, 2015-02-24:

[11:43:40] Кушелев Александр Юрьевич: Главное - понять, как метить сигнал, который идёт от эмбриона в гипоталамус будущей матери.
[11:44:03] Кушелев Александр Юрьевич: Схему я могу на форуме опубликовать?
[11:44:15] Кушелев Александр Юрьевич: Для магнетрона
[11:44:16] Zoldrax: Проблема показать для начала что сигнал есть и действует.
[11:44:28] Zoldrax: Да схему можно.
[11:45:40] Кушелев Александр Юрьевич: Так пометив как раз и можно показать, что из эмбриона вышло и в гипоталамус вошло.
[11:47:04] Кушелев Александр Юрьевич: Ирина писала, что у них есть замороженная кровь беременных, но это не совсем то, точнчее совсем не то...
[11:47:24] Кушелев Александр Юрьевич: Нужна не вся кровь, а только то, что вышло из эмбриона
[11:47:44] Кушелев Александр Юрьевич: И посмотреть, что из этого войдёт в гипоталамус
[11:48:44] Zoldrax: Я читал, что авторы из nature предполагают малое время жизни фактора старения.
[11:49:53] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно. Но нам нужен сигнал, отключающий механизм старения. И он должен дожить от выхода из эмбриона до входа в гипоталамус 
[11:51:08] Zoldrax: То что из эмбриона сигналы идут разные в том числе в гипоталамус никто не спорит. Спорят с остановкой ими старения. Поэтому и искать не начинают.
[11:52:29] Zoldrax: Вот то что фактор старения в крови, а не случайные поломки после натуровских статей соглашаются.
[11:52:50] Кушелев Александр Юрьевич: Придётся самим поискать...
[11:53:12] Кушелев Александр Юрьевич: Для этого нужно пометить все сигналы эмбриона и отловить те, что попадут в гипоталамус
[11:53:23] Кушелев Александр Юрьевич: Чем метить будем?
[11:53:27] Zoldrax: Самим не получится 
[11:54:10] Zoldrax: Это все равно финансирование другого уровня нужно.
[11:54:23] Кушелев Александр Юрьевич: Почему?
[11:54:59] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно достать некоторое количество эмбрионов, например, замороженных.
[11:55:05] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить их целиком.
[11:55:21] Кушелев Александр Юрьевич: Разморозить, и сделать инъекцию мышам
[11:55:43] Кушелев Александр Юрьевич: А потом исследовать гипоталамус в поисках меченных сигналов
[11:56:16] Кушелев Александр Юрьевич: В принципе дело не очень затратное
[11:56:51] Кушелев Александр Юрьевич: Конечно, для получения статистики, придётся повторять на большом количестве, но первый результат можно и на паре мышек получить
[11:56:55] Zoldrax: Это не серьезно. У нас даже доказать эффект остановки старения не удалось.
[11:57:56] Zoldrax: А тут сложная цепочка условий, которые должны совпасть. Начиная от того, что сигнал не портится при заморозке.
[11:58:43] Кушелев Александр Юрьевич: Да. Пока удалось увидеть зависимость продолжительности жизни от дозы инъекций. Маленькие дозы сокращают жизнь сильно, большие практически не сокращают
[11:59:18] Кушелев Александр Юрьевич: Можно попробовать и без заморозки. Но тут нужно работать быстро, т.к. сигнал может испортиться за десятки минут
[12:00:17] Кушелев Александр Юрьевич: Интересно, а пытался ли кто-нибудь пересаживать эмбрионы?
[12:00:26] Кушелев Александр Юрьевич: Пометил, и пересадил...
[12:00:35] Кушелев Александр Юрьевич: Тогда задержки во времени вообще не будет
[12:00:45] Кушелев Александр Юрьевич: Или ещё круче
[12:00:58] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить эмбрион прямо в утробе
[12:01:11] Кушелев Александр Юрьевич: А дальше ловить метки в гипоталамусе
[12:01:30] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть так уже кто-то делал?
[12:01:31] Zoldrax: На сколько я понимаю, то с могзгом пока эмбрионы не связывали.
[12:02:00] Кушелев Александр Юрьевич: Откуда-то узнали, что некоторые сигналы эмбриона попадают в гипоталамус будущей матери
[12:02:21] Zoldrax: Есть карта взаимодействия между разными участками мозга.
[12:02:24] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, может быть есть готовая таблица, которую нам нужно просто проанализировать в новом свете?
[12:02:43] Кушелев Александр Юрьевич: А есть карта взаимодействия "эмбрион-гипоталамус будущей матери"?
[12:02:55] Zoldrax: Например куда попадают метки из гипоталамуса и наоборот.
[12:03:15] Zoldrax: Но я видел только для мозг-мозг.
[12:03:54] Кушелев Александр Юрьевич: Давай поищем для "эмбрион-гипоталамус"
[12:04:02] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть это засекречено?
[12:04:41] Zoldrax: Думаю не делали. Был проект карта мозга для него все и сделали.
[12:05:41] Кушелев Александр Юрьевич: А откуда узнали, какие сигналы попадают из эмбриона в гипоталамус?
[12:07:04] Zoldrax: Я не разбирался. Уже не помню.
[12:09:25] Кушелев Александр Юрьевич: Давай с этого и начнём 
[12:10:37] Zoldrax:  )


2015.02.25 15:56:46

Skype, 2015-02-25:

[14:02:38] Кушелев Александр Юрьевич: Тебе удалось найти таблицы сигналов "эмбрион-гипоталамус"?
[14:04:09] Zoldrax: Нет. Сразу не увидел. Увидел несколько статей про белок KISS-1 , он обноруживается в гипоталамусе на первом триместре и в молодых организмах.
[14:04:27] Zoldrax: Доказана противометостазная его активность.
[14:04:40] Кушелев Александр Юрьевич: Уже интересно
[14:05:02] Кушелев Александр Юрьевич: А что, никто не догадался пометить эмбрион?
[14:05:41] Кушелев Александр Юрьевич: Там этих сигналов, попавших из эмбриона в гипоталамус должно быть больше 10
[14:06:04] Кушелев Александр Юрьевич: И скорее всего главные сигналы - информационные РНК в экзосомах
[14:06:06] Zoldrax: Как я понял, они мышь кунают в жидкий азот, а потом находят, что KISS-1 в гипоталамусе был 
[14:06:17] Кушелев Александр Юрьевич: Да...
[14:06:37] Кушелев Александр Юрьевич: Это когда они такую методу стали использовать?
[14:06:59] Кушелев Александр Юрьевич: Я её описывал лет 15 назад в рассказе "Эфиродактиль"
[14:07:19] Zoldrax: Статья 2014 года.
[14:07:28] Zoldrax: Когда метода не знаю.
[14:07:42] Кушелев Александр Юрьевич: Наверное, сами додумались.
[14:08:07] Кушелев Александр Юрьевич: Но это грубо
[14:08:20] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно метить эмбрион, причём прямо в утробе
[14:08:33] Zoldrax: Ну явно что не авторы статьи метод придумали, они его описывают как общепринятый 
[14:08:42] Кушелев Александр Юрьевич: Понятно
[14:09:06] Кушелев Александр Юрьевич: Если уж на видео могут эмбрион записывать, то пометить его наверняка можно
[14:09:15] Кушелев Александр Юрьевич: Весь вопрос, чем?
[14:10:03] Zoldrax: Да раз карту мозга и как там что циркулирует сделали, наверно и эмбрион можно.
[14:10:09] Кушелев Александр Юрьевич: Что прилипнет к экзосомам и продержится до гипоталамуса?
[14:10:42] Кушелев Александр Юрьевич: У меня стойкое подозрение, что это уже давно сделано
[14:11:09] Zoldrax: Я кидал статью про спец механизм транспорта экзосом через гематоэнцефалический барьер?
[14:11:17] Кушелев Александр Юрьевич: Нет
[14:12:05] Кушелев Александр Юрьевич: Пометить эмбрион и отследить меченные экзосомы в гипоталамусе - сравнительно дешёвая работа. Не верится, что никто этого не делал
[14:12:25] Zoldrax: Это надо у спецов спрашивать...
***
[14:13:21] Кушелев Александр Юрьевич: Она говорила, что поищет научные статьи на эту тему
[14:15:18] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно узнать полный набор сигналов гипоталамуса без беременности и в период беременности
[14:15:25] Кушелев Александр Юрьевич: Вычесть один из другого...
[14:16:51] Кушелев Александр Юрьевич: Наверняка набор сигналов гипоталамуса изучали и во время беременности
[14:17:36] Кушелев Александр Юрьевич: Сигналы гипоталамуса во время беременности добавляет не только эмбрион...
[14:17:57] Кушелев Александр Юрьевич: Поэтому и надо бы пометить эмбрион и отследить, что попадёт в гипоталамус
[14:18:15] Кушелев Александр Юрьевич: "Зачем платить больше"?
[14:18:20] Zoldrax: Есть исследования экзосом во время беременности, но в крови матери.
[14:18:28] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно
[14:18:48] Кушелев Александр Юрьевич: А нам нужно именно пересечение эмбриона и гипоталамуса будущей матери
[14:19:28] Кушелев Александр Юрьевич: В этом случае мы будем работать с минимумом сигналов
[14:20:27] Кушелев Александр Юрьевич: Где-то я видел "светящихся мышей"
[14:20:35] Кушелев Александр Юрьевич: Нам нужно "засветить эмбриона"
[14:20:39] Zoldrax: Дело в том, что получение геномных данных - очень отработанный процесс. А метки и сигналы - это новый эксперимент.
[14:21:09] Кушелев Александр Юрьевич: Так с метками и сигналами работают уже десятки лет
[14:21:15] Кушелев Александр Юрьевич: Это тоже отработанная методика
[14:21:29] Zoldrax: Да, но ...
[14:21:49] Кушелев Александр Юрьевич: "Хочешь жить вечно? - Накорми мышей!" 
[14:22:40] Кушелев Александр Юрьевич: "Перехват сигналов" - это и есть эликсир
[14:23:41] Кушелев Александр Юрьевич: Если в гипоталамусе будут копаться со скоростью 1 белок в год, то в лучшем случае докапаются лет за 10-15
[14:24:06] Кушелев Александр Юрьевич: А если устроить перехват всех сигналов эмбрион-гипоталамус, то проблема решится сразу
[14:24:26] Zoldrax: Мы даже точно не знаем экзосомы ли это? Гипотетически мне экзосомы нравятся в качестве сигнала, но это какое-то гадание.
[14:24:38] Кушелев Александр Юрьевич: Да какая разница?
[14:24:58] Кушелев Александр Юрьевич: Если пометить весь эмбрион, то в гипоталамусе засветятся все сигналы
[14:25:12] Кушелев Александр Юрьевич: Нужно метить тем, что метит все типы сигналов
[14:26:07] Zoldrax: Светиться могут и метаболиты после сложных преврвщений, а могут потерять светимость. Т.е. нужно знать что искать 
[14:27:30] Кушелев Александр Юрьевич: На первом этапе намылить эмбрион радиоактивным (чем?)
[14:28:49] Zoldrax: Да там все разлетится по всему взрослому организму, мне кажется.
[14:28:58] Кушелев Александр Юрьевич: Почему?
[14:29:07] Кушелев Александр Юрьевич: Тритий может и разлетится, а углерод?
[14:29:24] Кушелев Александр Юрьевич: Углерод похоже во все сигналы входит
[14:29:47] Zoldrax: Ну там же метаболизм эмбриона.
[14:30:00] Кушелев Александр Юрьевич: Конечно, что-то уйдёт, но мы же количественно можем отследить?
[14:30:46] Кушелев Александр Юрьевич: Время передачи сигнала из эмбриона в гипоталамус скорее всего - минуты
[14:30:56] Zoldrax: Ну я думаю, что метаболизм по сранению с сигнальной системой массово на порядки отличается.
[14:31:12] Кушелев Александр Юрьевич: Через минуты можно заморозить и смотреть, что в гипоталамусе светится
[15:41:23] Кушелев Александр Юрьевич: У тебя есть аппаратура, чтобы работать с мышами и радиоактивными метками?
[15:42:10] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве, как я понял, от мышей осталась только замороженная кровь беременных. Надо спросить о текущем поголовье "мелкого лабораторного скота" 



Обсуждение дизайна эксперимента 2014-2016

2014 - 2016


http://nanoworld.org.ru/topic/3/page/42/

2014.08.10 08:01:49

[8:53:32] Кушелев Александр Юрьевич: Доброе утро!
[8:53:57] Кушелев Александр Юрьевич: Американские ученые уже смогли реализовать дорогой вариант "эликсира" на лабораторных животных
[8:55:11] Кушелев Александр Юрьевич: В 2012-ом году я написал статью: "Прожиточный минимум вампира", где показал теоретическую возможность омоложения млекопитающих путём ежедневной замены крови. Американцы этот вариант реализовали в 2014 году, доказав принципиальную возможность омоложения экспериментально.
[8:55:41] Кушелев Александр Юрьевич: Но этот вариант для человека обойдётся приблизительно в 500 долл. ежедневно (7 литров крови по цене донорской)
[8:56:10] Кушелев Александр Юрьевич: Теперь задача перешла из разряда: "Можно ли?" в разряд "как сделать дешевле"
[8:57:02] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве третий год идут наши совместные эксперименты по созданию эликсира, который будет стоить не 500 долл., а 20 копеек за один день "вечной" молодости.
[8:57:51] Кушелев Александр Юрьевич: Сейчас вопрос стоит о том, где найти инвесторов, которые оплатят праймеры, с помощью которых мы сможем выделить сигнал отключения старения (феноптоза) из 10 000 сигналов эмбриона.
[8:58:58] ТФ: Молодец


2014.08.11 08:34:01

[10.08.2014 23:07:22] *****: А.Ю., информация по элексиру перестала появляться, Вы не в курсе последних новостей?
[10.08.2014 23:14:43] Кушелев Александр Юрьевич: А где она появлялась?
[10.08.2014 23:16:00] *****: Вы обновляли или геронтолог, или были новости с проекта на indigogo
[10.08.2014 23:17:11] Кушелев Александр Юрьевич: Последнее, что я получил из Киева - это лабораторный журнал
[10.08.2014 23:19:41] *****: Высосаное из пальца противостояние Киева и Москвы никак надеюсь не сказывается на исследованиях?
[10.08.2014 23:21:45] Кушелев Александр Юрьевич: Это не из пальца. Это за денежки дяди Сэма...
[10.08.2014 23:22:54] Кушелев Александр Юрьевич: Не знаю, что сейчас в Киеве, но последний раз связь была недели две назад. Тогда всё было по-старому
[10.08.2014 23:23:51] Кушелев Александр Юрьевич: Задержка в создании эликсира связана с отсутствием праймеров
[10.08.2014 23:23:59] Кушелев Александр Юрьевич: А праймеры - это 100 000 долл.


http://nanoworld.org.ru/topic/1453/page/57/

2016.09.26 22:18:59

[19:43:22] Виктория Соколик: А.Ю. надо обсудить одну модель по эликсиру молодости.
[19:45:05] Кушелев Александр Юрьевич: Звука на этом компьютере нет. Так что могу пока только текстом.
[19:59:00] Виктория Соколик: Идея такая: четыре группы животных (например крыс) по 12 шт. 6 мальчиков и 6 девочек. Первая - контроль (стареет как может), вторая - группа сравнения 1 (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови молодых животных), третья - группа сравнения 2 (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови молодых беременных самок) и четвертая - (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови эмбрионов). Интраназальное не инвазивное введение сыворотки крови с экзосомами молодости позволяет вести длительный хронический эксперимент и достигать гипоталамуса минуя гемато-энцефалический барьер. Кроме этого мы сосредоточимся только на информационной составляющей, минуя дополнительные опции очищения крови реципиента от метаболитов в старости буферной системой "молодой" крови при объединении кровеносных систем.
[20:01:07] Кушелев Александр Юрьевич: Очень  интересная идея. А Вы не могли бы изложить её на форуме лаборатории Наномир? Я сейчас не могу выходить на форум до среды. Основной компьютер сломался. А в среду уже смогу.
[20:01:41] Кушелев Александр Юрьевич: Основной вопрос: Хватит ли концентрации при таком способе введения?
[20:05:58] Виктория Соколик: Когда мы проверяли эффективность назальной терапии куркумина в липосомах в качестве противовоспалительного средства при амилоидозе на животных, концентрация куркумина была не просто малой, а сверхмалой. Объем вводимого раствора куркумина составлял 200 мкл, но ежедневно в течение 1 месяца. Эффект оказался весьма убедительным именно в отделах головного мозга.
[20:06:35] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно.
[20:07:12] Кушелев Александр Юрьевич: Если вводить сигнал, передаваемый в виде иРНК в экзосомах, то там тоже много не нужно. А если сыворотку крови, то это "другой компот" 
[20:12:26] Виктория Соколик: Сыворотка составляет 1/2 - 2/3 объема крови: уже в 2 раза объем уменьшается. Можно пробовать подобрать эффективный объем сыворотки предварительно на четвертой группе + контроль.  Это легче. Если будет наблюдаться дозо-зависимость, то это подтверждение наличия сигнала. Следующий шаг -- выделение сигнала.
[20:13:23] Кушелев Александр Юрьевич: Очень интересно...
[20:13:48] Кушелев Александр Юрьевич: У меня два разных менеджера интересуются, есть ли смета затрат для инвесторов?
[20:14:26] Кушелев Александр Юрьевич: Одну смету я им показываю (Киевскую), но может быть Вы можете составить смету на Ваш вариант исследования?
[20:22:54] Виктория Соколик: Эта идея пришла ко мне только сегодня. Надо ещё тщательно продумать контроль показателей старения (кроме времени жизни) на биохимическом, иммунологическом и нейрофизиологическом уровнях (статья расходов №1). Может какие-либо идеи найдутся у нашего киевского геронтолога. Пока могу только сказать, что животные в нашем виварии есть (корм для них! -статья расходов №2), а их понадобиться не 50 шт, а больше (источники сыворотки). Технически всё возможно, кроме как получать кровь у эмбрионов (ни разу не видела). И зарплата исполнителям (а ну-ка целый год мордоваться - статья расходов №3).
[21:30:13] Виктория Соколик: В моей постановке объединять кровеносные системы не понадобится
[21:32:17] Кушелев Александр Юрьевич: А Вы можете написать первую версию сметы? Пока будем обсуждать детали, глядишь и инвесторы подтянутся...
[21:35:28] Виктория Соколик: Дьявол прячется в деталях  . Надо всё обдумать, обсудить и определить маркеры старения в динамике жизни наших экспериментальных животных (в том числе и малые/иРНК в сыворотке крови). Вот такой итоговый скрининг сигналов и будет дороже всего стоить. А без него нет смысла даже затеваться.
[21:36:01] Кушелев Александр Юрьевич: Ну так включить в смету эту работу. В чём проблема?
[21:36:27] Кушелев Александр Юрьевич: Написать минимум и максимум
[21:36:43] Кушелев Александр Юрьевич: Если всё до конца обдумывать, то время потеряем
[21:37:41] Виктория Соколик: А.Ю. для этой работы нужны не деньги, а время и мозги. Потерять время мы всегда успеем, если будем сначала делать, а потом думать 
[21:38:37] Кушелев Александр Юрьевич: Так никто же не убеждает делать. Написать известную часть сметы, чтобы инвесторы подключились, начали зарплаты платить. Тогда и мысли будут быстрее шевелиться 
[21:39:24] Кушелев Александр Юрьевич: Чтобы привлечь мозги, нужны, например, деньги на зарплату 
[21:39:48] Кушелев Александр Юрьевич: Есть же инвесторы, которые это понимают
[21:40:12] Кушелев Александр Юрьевич: Они готовы платить за то, чтобы специалисты сконцентрировали свои мозги на данной проблеме.
[21:41:27] Кушелев Александр Юрьевич: Меня менеджеры спрашивают, есть ли смета, кроме Киевской? К инвесторам с пустыми руками не ходят. Нужно что-то показывать...
[21:42:26] Кушелев Александр Юрьевич: Один из менеджеров на форуме спрашивал, а сколько нужно денег для всей команды, а не только киевской группы.
[21:43:32] Кушелев Александр Юрьевич: Ещё один менеджер, который в Дмитрове живёт, сказал, что он работал с разными инвесторами. Без сметы они не воспринимают серьёзно.
[21:43:32] Виктория Соколик: А.Ю., я такой же бухгалтер как и Вы, поэтому предпочитаю наукой заниматься, а не сметы составлять.
[21:43:50] Кушелев Александр Юрьевич: Давайте найдём человека, который напишет.
[21:44:16] Кушелев Александр Юрьевич: Но ему нужно дать какую-то входную информацию, чтобы он начал искать цены и составлять смету
[21:44:36] Кушелев Александр Юрьевич: Например, нужно знать сколько примерно людей сможет выполнить работу
[21:44:52] Кушелев Александр Юрьевич: Какая у них типовая зарплата, он сам выяснит
[21:45:50] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, дмитровский менеджер готов написать смету, но ему нужно будет дать информацию, которую знаете только Вы
[21:46:31] Кушелев Александр Юрьевич: Названия работ, например.
[21:46:41] Кушелев Александр Юрьевич: Объёмы хотя бы прибизительно
[21:46:58] Кушелев Александр Юрьевич: И сроки хотя бы примерные по минимуму
[21:47:12 | Изменены 21:47:27] Кушелев Александр Юрьевич: А максимум - сам о себе скажет
[21:48:25] Кушелев Александр Юрьевич: Инвесторы по наличию сметы делают вывод о реальности работы
[21:48:35] Виктория Соколик: Для начала, я хотела бы обсудить эту идею со своим начальством. Если удастся запланировать тему в институте, это уже полдела. Вы же понимаете, что никого чужого со стороны в лабораторию института не пустят, а организовывать современную лабораторию под этот проект не по зубам даже группе инвесторов. Поэтому в проекте могут быть задействованы только мои коллеги.
[21:49:09] Кушелев Александр Юрьевич: Не понял.
[21:49:48] Кушелев Александр Юрьевич: А киевские геронтологи работают и со мной и с питерскими коллегами без проблем
[21:50:22] Кушелев Александр Юрьевич: Инвестор для киевского эксперимента покупал клетки. Другие инвесторы оплачивали корма
[21:50:28] Кушелев Александр Юрьевич: Медикаменты..
[21:50:38] Виктория Соколик: Кстати часть работ по скринингу малых и информационных РНК может быть выполнена в Полтаве в "мокром" эксперименте. Но для начала необходимо составить минимальный список каких.
[21:51:07] Кушелев Александр Юрьевич: В смете можно пока укрупнённо обозначить направления
[21:51:21] Кушелев Александр Юрьевич: И ориентировочно объёмы работ и количество задействованных специалистов
[21:51:49] Кушелев Александр Юрьевич: Инвесторы же не просто интересуются 
[21:53:09] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, о книге "Пикотехнология белков"... А как узнать, заказал ли кто-то книгу в издательстве? Или это коммерческая тайна?
[21:54:03] Кушелев Александр Юрьевич: Я так понял, что библиотеки заказывать на будут.
[21:54:51] Виктория Соколик: Вряд ли в Киеве или Питере занимались подпольными исследованиями в пределах государственных учреждений. Если речь идёт не о НИР института, тогда заключаются договора об аренде помещений, коммунальных платежей, эксплуатации оборудования, животных вивария и т.д. Это такие ДЕНЬГИ, оно Вам надо? Ведь проект не на 1 месяц и не на 2, а года на 1,5-2. Не заметить невозможно.
[21:56:13] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве не занимались подпольными исследованиями. Они даже от имени института писали письма на таможню, чтобы клетки, которые инвестор оплатил в Китае, доставили в институт без пошлины
[21:56:17] Виктория Соколик: Издательство не предоставляет такой информации, наверно чтобы гонорар не платить. Я ни на что и не претендую в денежном эквиваленте.
[21:56:44] Кушелев Александр Юрьевич: Так издательство вроде и не предлагало авторских гонораров
[21:56:52] Виктория Соколик: Значит они оформили тему, например хоздоговорную
[21:57:01] Кушелев Александр Юрьевич: Это Ирина знает
[21:57:24] Кушелев Александр Юрьевич: Но корма инвесторы тоже оплачивали. И не было проблем.
[21:57:50] Кушелев Александр Юрьевич: И медикаменты мы с  Ярославом отправляли в холодильнике поездом
[21:58:43] Кушелев Александр Юрьевич: Мне интересно, покупают книги "Пикотех" или "никому не надо" 
[21:59:37] Кушелев Александр Юрьевич: Я так понял, что издательство как-то рекламирует свои книги
[21:59:38] Виктория Соколик: Там есть пункт, что если покупается определённое количество экземпляров, то автору в конце года присылают какой-то %. Если продается меньше, то предоставляется право выкупить любую из изданных ими книг льготно что-ли, как-то так.
[22:00:08] Кушелев Александр Юрьевич: Т.е. в новом году мы узнаем, продали что-то или нет?
[22:00:12] Виктория Соколик: Да рекламирует, размещая на электронных сайтах
[22:00:22] Кушелев Александр Юрьевич: Тогда ждём-С
[22:00:54] Кушелев Александр Юрьевич: Но цены у них, конечно, заоблачные 75 евро за книгу
[22:01:56] Кушелев Александр Юрьевич: Я бы набрал название книги в Гугле и купил электронный вариант у авторов 
[22:02:33] Кушелев Александр Юрьевич: Тем более, что электронный вариант позволяет вести поиск по тексту книги, а бумажный нет...
[22:03:22] Виктория Соколик: А.Ю., продажа/покупка монографии - это стрельба из рогатки по воробьям. Я после защиты докторской буду лично предлагать нашей профильной научной элите её прочитать (в электронном виде). Сейчас не хочу дразнить гусей, поскольку дебаты как правило бывают жаркими 
[22:03:52] Кушелев Александр Юрьевич: Понятно
[22:05:12] Кушелев Александр Юрьевич: А Вы в курсе, что физики из Германии "нащупали" кольцегранный микромир с помощью атомного силового микроскопа?
[22:05:36] Кушелев Александр Юрьевич: Так что дебаты будут не жаркими, а очень жаркими 

2016.09.28 00:52:20

Создание средства для продления жизни


[22:36:57] Виктория Соколик: У меня есть уже три этапа исследования, но лучше я их завтра голосом расскажу.
[22:39:17] Кушелев Александр Юрьевич: Лучше текстом. Тогда это легко обсудить на форуме.
[22:40:10] Виктория Соколик: А.Ю., я вчера выложила на Вашем форуме нашу дискуссию и ни одного комментария.
[22:40:27] Виктория Соколик: С кем обсуждать?
[22:40:40] Кушелев Александр Юрьевич: Ничего страшного. Народ уже читает. Скоро подключится к дискуссии 
[22:41:08] Кушелев Александр Юрьевич: Обратите внимание, что на форуме сейчас 23 читателя одновременно!
[22:42:16] Кушелев Александр Юрьевич: А мы ещё рассылку на эту тему можем сделать...
[22:42:26] Кушелев Александр Юрьевич: 3000 подписчиков
[22:42:57] Кушелев Александр Юрьевич: И на фейсбуке тоже около 3000 читателей
[22:44:39] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, на форуме уже 30 читателей
[22:44:49] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть как раз Ваше сообщение их привлекло...


[22:48:35] Виктория Соколик:

Этап1. Выяснить природу сигнала от эмбриона. (Очень варварский и крайне сложный эксперимент): под УЗИ для животных (такие есть в ветклиниках) крысам-самкам во 2-ом триместре беременности (14 суток) в каждый эмбрион ввести двойную изотопную метку. Например, меченый аланин и меченый урацил. Далее декапетировать самок в динамике времени: 0,5 ч; 1 ч; 3 ч; 6 ч; 24 ч и 2-е сутки. В сыворотке крови и отделах головного мозга (гипоталамус, гипофиз, гиппокамп) регистрировать метку. Если обнаружим меченный урацил, то носитель сигнала -- РНК, если меченый аланин -- белки/пептиды. При положительном результате переходим к этапу 2.
[22:50:24] Кушелев Александр Юрьевич: Круто!
[22:50:58] Кушелев Александр Юрьевич: Золдракс как раз думал, как бы пометить, чтобы меченые молекулы не заполнили весь организм будущей матери
[22:52:25] Кушелев Александр Юрьевич: Но тут нужно отметить, что сигнал скорее всего сложный, т.е. не одна иРНК, а группа
[22:52:45] Кушелев Александр Юрьевич: А может быть и дублирование белковыми сигналами есть


[22:53:35] Виктория Соколик:

Этап 2. Из сыворотки крови беременных самок с изотопной меткой набором для выделения микроРНК выделить малые РНК и поставить их электрофорез в ПАГе с маркерами молекулярного веса. Покрасить гель бромистым этидием и в УФ вырезать отдельно все полученные фракции. На счетчики определить фракцию/ии микроРНК с изотопной меткой и следовательно молекулярный вес группы сигнальных микро РНК. При положительном результате переходим к этапу 3.

[22:53:36] Кушелев Александр Юрьевич: Для начала я хотел бы подключить к обсуждению Золдракса.
[22:54:21] Кушелев Александр Юрьевич: Очень круто. Но я пока не догоняю всех тонкостей...
[22:56:45] Кушелев Александр Юрьевич: Я написал Золдраксу в скайпе, но он пока не отвечает.


[23:02:27] Виктория Соколик:

Этап 3. Получить препаративное количество микроРНК из сыворотки беременных крыс во 2-ом триместре беременности. Сделать три концентрации микроРНК (например 2, 10 и 20). Упаковать в липосомы, чтобы на слизистой не разрушилось. Вводить старым крысам ежедневно на 100 мкл липосомной эмульсии с микроРНК в течение месяца. Зафиксировать исходные показатели и через месяц назальной терапии. Выявить действующую концентрацию. В качестве тестируемых маркеров можно померить наборами для ИФА например цитокины (TNFальфа, IL-10, IL-6) как показатель хронического неспецифического старческого воспаления. При положительном результате переходим к этапу 4.
[23:03:38] Кушелев Александр Юрьевич: Круто! А что говорит Ирина?
[23:05:34] Виктория Соколик: Ире идея понравилась, насчет маркеров старения нет никакой определённости. В целом она отошла от этого направления исследований и занимается геропротекторами для больных диабетом, инфарктом и т.д.
[23:06:06] Кушелев Александр Юрьевич: Обидно...


[23:08:13] Виктория Соколик:

Этап 4. С помощью праймеров и нуклеаз расшифровать нуклеотидные последовательности действующих микро РНК. Синтезировать нужное количество на амплификаторе. Использовать в следующем этапе тестирования.
[23:08:51] Кушелев Александр Юрьевич: ЗдОрово. Интересно, что скажет Золдракс...


[23:13:21] Виктория Соколик:

Этап 5. Упаковать в липосомы в выбранной действующей концентрации и использовать в эксперименте, описанном вчера, только вместо иммунологически опасной сыворотки крови крыс-беременных на 2-ом триместре беременности использовать липосомный препарат микроРНК определённого состава и определённой концентрации. В процессе работы надо провести скрининг биохимических, иммунологических и функциональных маркеров старения, кроме продолжительности жизни.
[23:19:18] Кушелев Александр Юрьевич: Да, очень круто! Мне в этом нужно тщательно разбираться. Надеюсь, что Золдракс быстро подключится. Может быть ему удастся найти какие-нибудь противоречия, которые ускользнули от Вас и Ирины. Я пока вообще не вижу никаких нестыковок, но они могут быть...

[23:21:48] Виктория Соколик: Вы конечно правы, нестыковки появятся "в случае отрицательного результата" на любом из этапов 


2016.09.28 00:27:38

Все мои рассуждения основаны только на предположениях.


Почему второй триместр, вроде-бы нужна вторая половина первого?

1. В крови матери плавает очень много ДНК плода. По ним можно восстановить большую часть генома плода. Урацил, конечно, будет встраиваться только в РНК, но их тоже будет плавать, скорее всего, по аналогии с ДНК, очень много разных, а нам нужны только те, которые запакованы в экзосомы, обладающие специфичностью к транспорту через гемато-энцефалический барьер. Без экзосом плацентарный барьер пройдут, скорее всего, только микро РНК, обладающие низкой специфичностью. Нам нужны, скорее всего, Small activating RNAs (saRNA). Белков, скорее всего, проходит очень много и аланин содержат почти все.

2. Да все хорошо, за исключением того, что это могут быть не microRNA, а saRNA, а они сохраняются, только в экзосомах, иначе их разрушит РНКаза. МикроРНК обладают шпилечной структурой, защищающей от РНКаз, но из за этого их множество и специфичность ограничены.

3. Я полагаю, что транспорт экзосом более специфичен, а ключ, например набор, интегринов в оболочке, гораздо сложнее простой упаковки в липосомы. Показаны механизмы специфичного транспорта экзосом через разные барьеры.

Боюсь, что без отделения сигналов в экзосомах от сободноплавающих РНК и белков не обойтись.

Я вот думаю, что может быть проще выделить и отсеквенировать все РНК из экзосом мыши до беременности и после. И найти отличия при беременности.

Я почти уверен, что сам сигнал возраста (старения) имеет кодовую модуляцию, т.е. от изменения концентрации в допустимых пределах эффект не меняется и на такую роль подходят только saRNA. А вот сигнал блокировки может быть каким угодно, в том числе и белковым, раз ложная беременность показала промежуточный эффект между беременными и небеременными гетерохронными парабионтами.



    Zoldrax пишет:

    Все мои рассуждения основаны только на предположениях.
    Почему второй триместр, вроде-бы нужна вторая половина первого?

    Victoriy пишет: Спасибо, что уточнили. Выходит, если у лабораторных крыс беременность 21 день, то нужны животные на 5-6 день беременности. А что во втором триместре "уже не тот компот"?

    Zoldrax пишет:

    1. В крови матери плавает очень много ДНК плода. По ним можно восстановить большую часть генома плода. Урацил, конечно, будет встраиваться только в РНК, но их тоже будет плавать, скорее всего, по аналогии с ДНК, очень много разных, а нам нужны только те, которые запакованы в экзосомы, обладающие специфичностью к транспорту через гемато-энцефалический барьер. Без экзосом плацентарный барьер пройдут, скорее всего, только микро РНК, обладающие низкой специфичностью. Нам нужны, скорее всего, Small activating RNAs (saRNA). Белков, скорее всего, проходит очень много и аланин содержат почти все.

    Victoriy пишет: Вот и хорошо, сравним электрофореграммы малых РНК сыворотки крови беременных крыс со спектром малых РНК из супернатантов целевых отделов головного мозга, чтобы найти те меченные изотопом фракции, которые пришли в мозг из эмбриона и миновали оба тканевых барьера (плацентарный и ГЭБ). Скорее всего это будет суммарная фракция microРНК+saRNA, поскольку у них близкий молвес.

    Zoldrax пишет:

    2. Да все хорошо, за исключением того, что это могут быть не microRNA, а  saRNA, а они сохраняются, только в экзосомах, иначе их разрушит РНКаза. МикроРНК обладают шпилечной структурой, защищающей от РНКаз, но из за этого их множество и специфичность ограничены.

    Victoriy пишет: Вообще-то, saRNA тоже имеют двухцепочечную структуру. И потом, для защиты от разрушающего действия РНКаз все процедуры выделения и анализа нужно проводить в присутствие ингибиторов (в продаже есть много универсальных ингибиторных коктейлей).

    Zoldrax пишет:

    3. Я полагаю, что транспорт экзосом более специфичен, а ключ, например набор, интегринов в оболочке, гораздо сложнее простой упаковки в липосомы. Показаны механизмы специфичного транспорта экзосом через разные барьеры.

    Victoriy пишет: Так оно и есть. Но простые фосфолипид/холестериновые липосомы тоже не промах и замечательно справляются с бережной транспортировкой содержимого. 
    Если нам повезёт и удастся идентифицировать, например с помощью набора антител, меченную по аланину фракцию/ии белков в супернатантах головного мозга, то очевидно, что они из эмбриона и скорее всего пришли в составе экзосом. А далее ничего нам не может помешать встраивать сигнальный белок в липосомы, чтобы имитировать специфическую векторность экзосом.

    Zoldrax пишет:

    Боюсь, что без отделения сигналов в экзосомах от свободно плавающих РНК и белков не обойтись.

    Victoriy пишет: А я вот боюсь всего, что связано с выделением и сохранением целостности экзосом. Поэтому тщательно избегаю этого, как только могу. Вы хоть представляете себе эти длительные и многоступенчатые ультрацентрифугирования для получения конечного результата. Пересмотрите предлагаемые методики. В одних нет ЭДТА, который якобы разрушает липидный слой, в других он есть. В одних столько то тысяч об/мин, в других другое. И все они заканчиваются фразой: Недостатками способа являются недостаточная чистота целевого продукта (примесь микрочастиц диаметром 100-200 нм), длительность выделения экзосом (более 10 ч), высокая стоимость коммерческого набора для выделения экзосом, ограниченное количество экзосом, как следствие, полученные результаты о содержании малых РНК в составе экзосом являются недостоверными.
    В своё время мне повезло и я проскочила период, когда липопротеины изучали методами ультрацентрифугирования. В моё время перешли к электрофорезу. Но я помню, что даже плотные липо-протеиновые комплексы разрушались в ходе фракционирования при больших g. Поэтому за судьбу мембранных пузырьков в таких условиях я не дам даже ломаного гроша.

    Zoldrax пишет:

    Я вот думаю, что может быть проще выделить и отсеквенировать все РНК из экзосом мыши до беременности и после. И найти отличия при беременности.

    Victoriy пишет: Поверьте, что не проще технически (см. выше) и главным камнем преткновения для Вас станет чистота и полнота фракции экзосом. Не говоря уже о том, что отсеквенировать все РНК затратно.

    Zoldrax пишет:

    Я почти уверен, что сам сигнал возраста (старения) имеет кодовую модуляцию, т.е. от изменения концентрации в допустимых пределах эффект не меняется и на такую роль подходят только saRNA. А вот сигнал блокировки может быть каким угодно, в том числе и белковым, раз ложная беременность показала промежуточный эффект между беременными и небеременными гетерохронными парабионтами.

    Victoriy пишет: Прокомментируйте этот тезис подробнее и с фактами. До сих пор я считала, что изменение концентрации любого регулятора является вторичным событием по отношению к изменению чувствительности к нему.




    Контактная информация

    Телефон
    +7 (903) 2003424
    А.Ю.Кушелев
    Сайт
    nanoworld.org.ru/
    Форум Лаборатории Наномир
    nanoworld.narod.ru/
    Сайт Лаборатории Наномир
    Skype
    kushelev2009
    Экспертиза научных проектов, консультации