Сайт создан на платформе Nethouse. Хотите такой же?
Владельцу сайта

Обсуждение дизайна эксперимента 2014-2016

2014 - 2016


http://nanoworld.org.ru/topic/3/page/42/

2014.08.10 08:01:49

[8:53:32] Кушелев Александр Юрьевич: Доброе утро!
[8:53:57] Кушелев Александр Юрьевич: Американские ученые уже смогли реализовать дорогой вариант "эликсира" на лабораторных животных
[8:55:11] Кушелев Александр Юрьевич: В 2012-ом году я написал статью: "Прожиточный минимум вампира", где показал теоретическую возможность омоложения млекопитающих путём ежедневной замены крови. Американцы этот вариант реализовали в 2014 году, доказав принципиальную возможность омоложения экспериментально.
[8:55:41] Кушелев Александр Юрьевич: Но этот вариант для человека обойдётся приблизительно в 500 долл. ежедневно (7 литров крови по цене донорской)
[8:56:10] Кушелев Александр Юрьевич: Теперь задача перешла из разряда: "Можно ли?" в разряд "как сделать дешевле"
[8:57:02] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве третий год идут наши совместные эксперименты по созданию эликсира, который будет стоить не 500 долл., а 20 копеек за один день "вечной" молодости.
[8:57:51] Кушелев Александр Юрьевич: Сейчас вопрос стоит о том, где найти инвесторов, которые оплатят праймеры, с помощью которых мы сможем выделить сигнал отключения старения (феноптоза) из 10 000 сигналов эмбриона.
[8:58:58] ТФ: Молодец


2014.08.11 08:34:01

[10.08.2014 23:07:22] *****: А.Ю., информация по элексиру перестала появляться, Вы не в курсе последних новостей?
[10.08.2014 23:14:43] Кушелев Александр Юрьевич: А где она появлялась?
[10.08.2014 23:16:00] *****: Вы обновляли или геронтолог, или были новости с проекта на indigogo
[10.08.2014 23:17:11] Кушелев Александр Юрьевич: Последнее, что я получил из Киева - это лабораторный журнал
[10.08.2014 23:19:41] *****: Высосаное из пальца противостояние Киева и Москвы никак надеюсь не сказывается на исследованиях?
[10.08.2014 23:21:45] Кушелев Александр Юрьевич: Это не из пальца. Это за денежки дяди Сэма...
[10.08.2014 23:22:54] Кушелев Александр Юрьевич: Не знаю, что сейчас в Киеве, но последний раз связь была недели две назад. Тогда всё было по-старому
[10.08.2014 23:23:51] Кушелев Александр Юрьевич: Задержка в создании эликсира связана с отсутствием праймеров
[10.08.2014 23:23:59] Кушелев Александр Юрьевич: А праймеры - это 100 000 долл.


http://nanoworld.org.ru/topic/1453/page/57/

2016.09.26 22:18:59

[19:43:22] Виктория Соколик: А.Ю. надо обсудить одну модель по эликсиру молодости.
[19:45:05] Кушелев Александр Юрьевич: Звука на этом компьютере нет. Так что могу пока только текстом.
[19:59:00] Виктория Соколик: Идея такая: четыре группы животных (например крыс) по 12 шт. 6 мальчиков и 6 девочек. Первая - контроль (стареет как может), вторая - группа сравнения 1 (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови молодых животных), третья - группа сравнения 2 (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови молодых беременных самок) и четвертая - (в течение 1 год еженедельно или ежедневно? получают интраназально сыворотку крови эмбрионов). Интраназальное не инвазивное введение сыворотки крови с экзосомами молодости позволяет вести длительный хронический эксперимент и достигать гипоталамуса минуя гемато-энцефалический барьер. Кроме этого мы сосредоточимся только на информационной составляющей, минуя дополнительные опции очищения крови реципиента от метаболитов в старости буферной системой "молодой" крови при объединении кровеносных систем.
[20:01:07] Кушелев Александр Юрьевич: Очень  интересная идея. А Вы не могли бы изложить её на форуме лаборатории Наномир? Я сейчас не могу выходить на форум до среды. Основной компьютер сломался. А в среду уже смогу.
[20:01:41] Кушелев Александр Юрьевич: Основной вопрос: Хватит ли концентрации при таком способе введения?
[20:05:58] Виктория Соколик: Когда мы проверяли эффективность назальной терапии куркумина в липосомах в качестве противовоспалительного средства при амилоидозе на животных, концентрация куркумина была не просто малой, а сверхмалой. Объем вводимого раствора куркумина составлял 200 мкл, но ежедневно в течение 1 месяца. Эффект оказался весьма убедительным именно в отделах головного мозга.
[20:06:35] Кушелев Александр Юрьевич: Это понятно.
[20:07:12] Кушелев Александр Юрьевич: Если вводить сигнал, передаваемый в виде иРНК в экзосомах, то там тоже много не нужно. А если сыворотку крови, то это "другой компот" 
[20:12:26] Виктория Соколик: Сыворотка составляет 1/2 - 2/3 объема крови: уже в 2 раза объем уменьшается. Можно пробовать подобрать эффективный объем сыворотки предварительно на четвертой группе + контроль.  Это легче. Если будет наблюдаться дозо-зависимость, то это подтверждение наличия сигнала. Следующий шаг -- выделение сигнала.
[20:13:23] Кушелев Александр Юрьевич: Очень интересно...
[20:13:48] Кушелев Александр Юрьевич: У меня два разных менеджера интересуются, есть ли смета затрат для инвесторов?
[20:14:26] Кушелев Александр Юрьевич: Одну смету я им показываю (Киевскую), но может быть Вы можете составить смету на Ваш вариант исследования?
[20:22:54] Виктория Соколик: Эта идея пришла ко мне только сегодня. Надо ещё тщательно продумать контроль показателей старения (кроме времени жизни) на биохимическом, иммунологическом и нейрофизиологическом уровнях (статья расходов №1). Может какие-либо идеи найдутся у нашего киевского геронтолога. Пока могу только сказать, что животные в нашем виварии есть (корм для них! -статья расходов №2), а их понадобиться не 50 шт, а больше (источники сыворотки). Технически всё возможно, кроме как получать кровь у эмбрионов (ни разу не видела). И зарплата исполнителям (а ну-ка целый год мордоваться - статья расходов №3).
[21:30:13] Виктория Соколик: В моей постановке объединять кровеносные системы не понадобится
[21:32:17] Кушелев Александр Юрьевич: А Вы можете написать первую версию сметы? Пока будем обсуждать детали, глядишь и инвесторы подтянутся...
[21:35:28] Виктория Соколик: Дьявол прячется в деталях  . Надо всё обдумать, обсудить и определить маркеры старения в динамике жизни наших экспериментальных животных (в том числе и малые/иРНК в сыворотке крови). Вот такой итоговый скрининг сигналов и будет дороже всего стоить. А без него нет смысла даже затеваться.
[21:36:01] Кушелев Александр Юрьевич: Ну так включить в смету эту работу. В чём проблема?
[21:36:27] Кушелев Александр Юрьевич: Написать минимум и максимум
[21:36:43] Кушелев Александр Юрьевич: Если всё до конца обдумывать, то время потеряем
[21:37:41] Виктория Соколик: А.Ю. для этой работы нужны не деньги, а время и мозги. Потерять время мы всегда успеем, если будем сначала делать, а потом думать 
[21:38:37] Кушелев Александр Юрьевич: Так никто же не убеждает делать. Написать известную часть сметы, чтобы инвесторы подключились, начали зарплаты платить. Тогда и мысли будут быстрее шевелиться 
[21:39:24] Кушелев Александр Юрьевич: Чтобы привлечь мозги, нужны, например, деньги на зарплату 
[21:39:48] Кушелев Александр Юрьевич: Есть же инвесторы, которые это понимают
[21:40:12] Кушелев Александр Юрьевич: Они готовы платить за то, чтобы специалисты сконцентрировали свои мозги на данной проблеме.
[21:41:27] Кушелев Александр Юрьевич: Меня менеджеры спрашивают, есть ли смета, кроме Киевской? К инвесторам с пустыми руками не ходят. Нужно что-то показывать...
[21:42:26] Кушелев Александр Юрьевич: Один из менеджеров на форуме спрашивал, а сколько нужно денег для всей команды, а не только киевской группы.
[21:43:32] Кушелев Александр Юрьевич: Ещё один менеджер, который в Дмитрове живёт, сказал, что он работал с разными инвесторами. Без сметы они не воспринимают серьёзно.
[21:43:32] Виктория Соколик: А.Ю., я такой же бухгалтер как и Вы, поэтому предпочитаю наукой заниматься, а не сметы составлять.
[21:43:50] Кушелев Александр Юрьевич: Давайте найдём человека, который напишет.
[21:44:16] Кушелев Александр Юрьевич: Но ему нужно дать какую-то входную информацию, чтобы он начал искать цены и составлять смету
[21:44:36] Кушелев Александр Юрьевич: Например, нужно знать сколько примерно людей сможет выполнить работу
[21:44:52] Кушелев Александр Юрьевич: Какая у них типовая зарплата, он сам выяснит
[21:45:50] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, дмитровский менеджер готов написать смету, но ему нужно будет дать информацию, которую знаете только Вы
[21:46:31] Кушелев Александр Юрьевич: Названия работ, например.
[21:46:41] Кушелев Александр Юрьевич: Объёмы хотя бы прибизительно
[21:46:58] Кушелев Александр Юрьевич: И сроки хотя бы примерные по минимуму
[21:47:12 | Изменены 21:47:27] Кушелев Александр Юрьевич: А максимум - сам о себе скажет
[21:48:25] Кушелев Александр Юрьевич: Инвесторы по наличию сметы делают вывод о реальности работы
[21:48:35] Виктория Соколик: Для начала, я хотела бы обсудить эту идею со своим начальством. Если удастся запланировать тему в институте, это уже полдела. Вы же понимаете, что никого чужого со стороны в лабораторию института не пустят, а организовывать современную лабораторию под этот проект не по зубам даже группе инвесторов. Поэтому в проекте могут быть задействованы только мои коллеги.
[21:49:09] Кушелев Александр Юрьевич: Не понял.
[21:49:48] Кушелев Александр Юрьевич: А киевские геронтологи работают и со мной и с питерскими коллегами без проблем
[21:50:22] Кушелев Александр Юрьевич: Инвестор для киевского эксперимента покупал клетки. Другие инвесторы оплачивали корма
[21:50:28] Кушелев Александр Юрьевич: Медикаменты..
[21:50:38] Виктория Соколик: Кстати часть работ по скринингу малых и информационных РНК может быть выполнена в Полтаве в "мокром" эксперименте. Но для начала необходимо составить минимальный список каких.
[21:51:07] Кушелев Александр Юрьевич: В смете можно пока укрупнённо обозначить направления
[21:51:21] Кушелев Александр Юрьевич: И ориентировочно объёмы работ и количество задействованных специалистов
[21:51:49] Кушелев Александр Юрьевич: Инвесторы же не просто интересуются 
[21:53:09] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, о книге "Пикотехнология белков"... А как узнать, заказал ли кто-то книгу в издательстве? Или это коммерческая тайна?
[21:54:03] Кушелев Александр Юрьевич: Я так понял, что библиотеки заказывать на будут.
[21:54:51] Виктория Соколик: Вряд ли в Киеве или Питере занимались подпольными исследованиями в пределах государственных учреждений. Если речь идёт не о НИР института, тогда заключаются договора об аренде помещений, коммунальных платежей, эксплуатации оборудования, животных вивария и т.д. Это такие ДЕНЬГИ, оно Вам надо? Ведь проект не на 1 месяц и не на 2, а года на 1,5-2. Не заметить невозможно.
[21:56:13] Кушелев Александр Юрьевич: В Киеве не занимались подпольными исследованиями. Они даже от имени института писали письма на таможню, чтобы клетки, которые инвестор оплатил в Китае, доставили в институт без пошлины
[21:56:17] Виктория Соколик: Издательство не предоставляет такой информации, наверно чтобы гонорар не платить. Я ни на что и не претендую в денежном эквиваленте.
[21:56:44] Кушелев Александр Юрьевич: Так издательство вроде и не предлагало авторских гонораров
[21:56:52] Виктория Соколик: Значит они оформили тему, например хоздоговорную
[21:57:01] Кушелев Александр Юрьевич: Это Ирина знает
[21:57:24] Кушелев Александр Юрьевич: Но корма инвесторы тоже оплачивали. И не было проблем.
[21:57:50] Кушелев Александр Юрьевич: И медикаменты мы с  Ярославом отправляли в холодильнике поездом
[21:58:43] Кушелев Александр Юрьевич: Мне интересно, покупают книги "Пикотех" или "никому не надо" 
[21:59:37] Кушелев Александр Юрьевич: Я так понял, что издательство как-то рекламирует свои книги
[21:59:38] Виктория Соколик: Там есть пункт, что если покупается определённое количество экземпляров, то автору в конце года присылают какой-то %. Если продается меньше, то предоставляется право выкупить любую из изданных ими книг льготно что-ли, как-то так.
[22:00:08] Кушелев Александр Юрьевич: Т.е. в новом году мы узнаем, продали что-то или нет?
[22:00:12] Виктория Соколик: Да рекламирует, размещая на электронных сайтах
[22:00:22] Кушелев Александр Юрьевич: Тогда ждём-С
[22:00:54] Кушелев Александр Юрьевич: Но цены у них, конечно, заоблачные 75 евро за книгу
[22:01:56] Кушелев Александр Юрьевич: Я бы набрал название книги в Гугле и купил электронный вариант у авторов 
[22:02:33] Кушелев Александр Юрьевич: Тем более, что электронный вариант позволяет вести поиск по тексту книги, а бумажный нет...
[22:03:22] Виктория Соколик: А.Ю., продажа/покупка монографии - это стрельба из рогатки по воробьям. Я после защиты докторской буду лично предлагать нашей профильной научной элите её прочитать (в электронном виде). Сейчас не хочу дразнить гусей, поскольку дебаты как правило бывают жаркими 
[22:03:52] Кушелев Александр Юрьевич: Понятно
[22:05:12] Кушелев Александр Юрьевич: А Вы в курсе, что физики из Германии "нащупали" кольцегранный микромир с помощью атомного силового микроскопа?
[22:05:36] Кушелев Александр Юрьевич: Так что дебаты будут не жаркими, а очень жаркими 

2016.09.28 00:52:20

Создание средства для продления жизни


[22:36:57] Виктория Соколик: У меня есть уже три этапа исследования, но лучше я их завтра голосом расскажу.
[22:39:17] Кушелев Александр Юрьевич: Лучше текстом. Тогда это легко обсудить на форуме.
[22:40:10] Виктория Соколик: А.Ю., я вчера выложила на Вашем форуме нашу дискуссию и ни одного комментария.
[22:40:27] Виктория Соколик: С кем обсуждать?
[22:40:40] Кушелев Александр Юрьевич: Ничего страшного. Народ уже читает. Скоро подключится к дискуссии 
[22:41:08] Кушелев Александр Юрьевич: Обратите внимание, что на форуме сейчас 23 читателя одновременно!
[22:42:16] Кушелев Александр Юрьевич: А мы ещё рассылку на эту тему можем сделать...
[22:42:26] Кушелев Александр Юрьевич: 3000 подписчиков
[22:42:57] Кушелев Александр Юрьевич: И на фейсбуке тоже около 3000 читателей
[22:44:39] Кушелев Александр Юрьевич: Кстати, на форуме уже 30 читателей
[22:44:49] Кушелев Александр Юрьевич: Может быть как раз Ваше сообщение их привлекло...


[22:48:35] Виктория Соколик:

Этап1. Выяснить природу сигнала от эмбриона. (Очень варварский и крайне сложный эксперимент): под УЗИ для животных (такие есть в ветклиниках) крысам-самкам во 2-ом триместре беременности (14 суток) в каждый эмбрион ввести двойную изотопную метку. Например, меченый аланин и меченый урацил. Далее декапетировать самок в динамике времени: 0,5 ч; 1 ч; 3 ч; 6 ч; 24 ч и 2-е сутки. В сыворотке крови и отделах головного мозга (гипоталамус, гипофиз, гиппокамп) регистрировать метку. Если обнаружим меченный урацил, то носитель сигнала -- РНК, если меченый аланин -- белки/пептиды. При положительном результате переходим к этапу 2.
[22:50:24] Кушелев Александр Юрьевич: Круто!
[22:50:58] Кушелев Александр Юрьевич: Золдракс как раз думал, как бы пометить, чтобы меченые молекулы не заполнили весь организм будущей матери
[22:52:25] Кушелев Александр Юрьевич: Но тут нужно отметить, что сигнал скорее всего сложный, т.е. не одна иРНК, а группа
[22:52:45] Кушелев Александр Юрьевич: А может быть и дублирование белковыми сигналами есть


[22:53:35] Виктория Соколик:

Этап 2. Из сыворотки крови беременных самок с изотопной меткой набором для выделения микроРНК выделить малые РНК и поставить их электрофорез в ПАГе с маркерами молекулярного веса. Покрасить гель бромистым этидием и в УФ вырезать отдельно все полученные фракции. На счетчики определить фракцию/ии микроРНК с изотопной меткой и следовательно молекулярный вес группы сигнальных микро РНК. При положительном результате переходим к этапу 3.

[22:53:36] Кушелев Александр Юрьевич: Для начала я хотел бы подключить к обсуждению Золдракса.
[22:54:21] Кушелев Александр Юрьевич: Очень круто. Но я пока не догоняю всех тонкостей...
[22:56:45] Кушелев Александр Юрьевич: Я написал Золдраксу в скайпе, но он пока не отвечает.


[23:02:27] Виктория Соколик:

Этап 3. Получить препаративное количество микроРНК из сыворотки беременных крыс во 2-ом триместре беременности. Сделать три концентрации микроРНК (например 2, 10 и 20). Упаковать в липосомы, чтобы на слизистой не разрушилось. Вводить старым крысам ежедневно на 100 мкл липосомной эмульсии с микроРНК в течение месяца. Зафиксировать исходные показатели и через месяц назальной терапии. Выявить действующую концентрацию. В качестве тестируемых маркеров можно померить наборами для ИФА например цитокины (TNFальфа, IL-10, IL-6) как показатель хронического неспецифического старческого воспаления. При положительном результате переходим к этапу 4.
[23:03:38] Кушелев Александр Юрьевич: Круто! А что говорит Ирина?
[23:05:34] Виктория Соколик: Ире идея понравилась, насчет маркеров старения нет никакой определённости. В целом она отошла от этого направления исследований и занимается геропротекторами для больных диабетом, инфарктом и т.д.
[23:06:06] Кушелев Александр Юрьевич: Обидно...


[23:08:13] Виктория Соколик:

Этап 4. С помощью праймеров и нуклеаз расшифровать нуклеотидные последовательности действующих микро РНК. Синтезировать нужное количество на амплификаторе. Использовать в следующем этапе тестирования.
[23:08:51] Кушелев Александр Юрьевич: ЗдОрово. Интересно, что скажет Золдракс...


[23:13:21] Виктория Соколик:

Этап 5. Упаковать в липосомы в выбранной действующей концентрации и использовать в эксперименте, описанном вчера, только вместо иммунологически опасной сыворотки крови крыс-беременных на 2-ом триместре беременности использовать липосомный препарат микроРНК определённого состава и определённой концентрации. В процессе работы надо провести скрининг биохимических, иммунологических и функциональных маркеров старения, кроме продолжительности жизни.
[23:19:18] Кушелев Александр Юрьевич: Да, очень круто! Мне в этом нужно тщательно разбираться. Надеюсь, что Золдракс быстро подключится. Может быть ему удастся найти какие-нибудь противоречия, которые ускользнули от Вас и Ирины. Я пока вообще не вижу никаких нестыковок, но они могут быть...

[23:21:48] Виктория Соколик: Вы конечно правы, нестыковки появятся "в случае отрицательного результата" на любом из этапов 


2016.09.28 00:27:38

Все мои рассуждения основаны только на предположениях.


Почему второй триместр, вроде-бы нужна вторая половина первого?

1. В крови матери плавает очень много ДНК плода. По ним можно восстановить большую часть генома плода. Урацил, конечно, будет встраиваться только в РНК, но их тоже будет плавать, скорее всего, по аналогии с ДНК, очень много разных, а нам нужны только те, которые запакованы в экзосомы, обладающие специфичностью к транспорту через гемато-энцефалический барьер. Без экзосом плацентарный барьер пройдут, скорее всего, только микро РНК, обладающие низкой специфичностью. Нам нужны, скорее всего, Small activating RNAs (saRNA). Белков, скорее всего, проходит очень много и аланин содержат почти все.

2. Да все хорошо, за исключением того, что это могут быть не microRNA, а saRNA, а они сохраняются, только в экзосомах, иначе их разрушит РНКаза. МикроРНК обладают шпилечной структурой, защищающей от РНКаз, но из за этого их множество и специфичность ограничены.

3. Я полагаю, что транспорт экзосом более специфичен, а ключ, например набор, интегринов в оболочке, гораздо сложнее простой упаковки в липосомы. Показаны механизмы специфичного транспорта экзосом через разные барьеры.

Боюсь, что без отделения сигналов в экзосомах от сободноплавающих РНК и белков не обойтись.

Я вот думаю, что может быть проще выделить и отсеквенировать все РНК из экзосом мыши до беременности и после. И найти отличия при беременности.

Я почти уверен, что сам сигнал возраста (старения) имеет кодовую модуляцию, т.е. от изменения концентрации в допустимых пределах эффект не меняется и на такую роль подходят только saRNA. А вот сигнал блокировки может быть каким угодно, в том числе и белковым, раз ложная беременность показала промежуточный эффект между беременными и небеременными гетерохронными парабионтами.



    Zoldrax пишет:

    Все мои рассуждения основаны только на предположениях.
    Почему второй триместр, вроде-бы нужна вторая половина первого?

    Victoriy пишет: Спасибо, что уточнили. Выходит, если у лабораторных крыс беременность 21 день, то нужны животные на 5-6 день беременности. А что во втором триместре "уже не тот компот"?

    Zoldrax пишет:

    1. В крови матери плавает очень много ДНК плода. По ним можно восстановить большую часть генома плода. Урацил, конечно, будет встраиваться только в РНК, но их тоже будет плавать, скорее всего, по аналогии с ДНК, очень много разных, а нам нужны только те, которые запакованы в экзосомы, обладающие специфичностью к транспорту через гемато-энцефалический барьер. Без экзосом плацентарный барьер пройдут, скорее всего, только микро РНК, обладающие низкой специфичностью. Нам нужны, скорее всего, Small activating RNAs (saRNA). Белков, скорее всего, проходит очень много и аланин содержат почти все.

    Victoriy пишет: Вот и хорошо, сравним электрофореграммы малых РНК сыворотки крови беременных крыс со спектром малых РНК из супернатантов целевых отделов головного мозга, чтобы найти те меченные изотопом фракции, которые пришли в мозг из эмбриона и миновали оба тканевых барьера (плацентарный и ГЭБ). Скорее всего это будет суммарная фракция microРНК+saRNA, поскольку у них близкий молвес.

    Zoldrax пишет:

    2. Да все хорошо, за исключением того, что это могут быть не microRNA, а  saRNA, а они сохраняются, только в экзосомах, иначе их разрушит РНКаза. МикроРНК обладают шпилечной структурой, защищающей от РНКаз, но из за этого их множество и специфичность ограничены.

    Victoriy пишет: Вообще-то, saRNA тоже имеют двухцепочечную структуру. И потом, для защиты от разрушающего действия РНКаз все процедуры выделения и анализа нужно проводить в присутствие ингибиторов (в продаже есть много универсальных ингибиторных коктейлей).

    Zoldrax пишет:

    3. Я полагаю, что транспорт экзосом более специфичен, а ключ, например набор, интегринов в оболочке, гораздо сложнее простой упаковки в липосомы. Показаны механизмы специфичного транспорта экзосом через разные барьеры.

    Victoriy пишет: Так оно и есть. Но простые фосфолипид/холестериновые липосомы тоже не промах и замечательно справляются с бережной транспортировкой содержимого. 
    Если нам повезёт и удастся идентифицировать, например с помощью набора антител, меченную по аланину фракцию/ии белков в супернатантах головного мозга, то очевидно, что они из эмбриона и скорее всего пришли в составе экзосом. А далее ничего нам не может помешать встраивать сигнальный белок в липосомы, чтобы имитировать специфическую векторность экзосом.

    Zoldrax пишет:

    Боюсь, что без отделения сигналов в экзосомах от свободно плавающих РНК и белков не обойтись.

    Victoriy пишет: А я вот боюсь всего, что связано с выделением и сохранением целостности экзосом. Поэтому тщательно избегаю этого, как только могу. Вы хоть представляете себе эти длительные и многоступенчатые ультрацентрифугирования для получения конечного результата. Пересмотрите предлагаемые методики. В одних нет ЭДТА, который якобы разрушает липидный слой, в других он есть. В одних столько то тысяч об/мин, в других другое. И все они заканчиваются фразой: Недостатками способа являются недостаточная чистота целевого продукта (примесь микрочастиц диаметром 100-200 нм), длительность выделения экзосом (более 10 ч), высокая стоимость коммерческого набора для выделения экзосом, ограниченное количество экзосом, как следствие, полученные результаты о содержании малых РНК в составе экзосом являются недостоверными.
    В своё время мне повезло и я проскочила период, когда липопротеины изучали методами ультрацентрифугирования. В моё время перешли к электрофорезу. Но я помню, что даже плотные липо-протеиновые комплексы разрушались в ходе фракционирования при больших g. Поэтому за судьбу мембранных пузырьков в таких условиях я не дам даже ломаного гроша.

    Zoldrax пишет:

    Я вот думаю, что может быть проще выделить и отсеквенировать все РНК из экзосом мыши до беременности и после. И найти отличия при беременности.

    Victoriy пишет: Поверьте, что не проще технически (см. выше) и главным камнем преткновения для Вас станет чистота и полнота фракции экзосом. Не говоря уже о том, что отсеквенировать все РНК затратно.

    Zoldrax пишет:

    Я почти уверен, что сам сигнал возраста (старения) имеет кодовую модуляцию, т.е. от изменения концентрации в допустимых пределах эффект не меняется и на такую роль подходят только saRNA. А вот сигнал блокировки может быть каким угодно, в том числе и белковым, раз ложная беременность показала промежуточный эффект между беременными и небеременными гетерохронными парабионтами.

    Victoriy пишет: Прокомментируйте этот тезис подробнее и с фактами. До сих пор я считала, что изменение концентрации любого регулятора является вторичным событием по отношению к изменению чувствительности к нему.